抗体F(ab')2片段靶向的载多柔比星免疫毫微粒的构建及其抗肝癌作用

目的：构建抗体F（ab')2片段靶向的载药免疫毫微粒；评价F（ab')2片段免疫毫微粒对肿瘤的特异结合性及杀伤作用。方法：采用异型双功能交联剂琥珀酰亚胺基－3－（2－吡啶二硫）丙酸酯（SPDP）将抗人肝癌单抗HAb18或对照抗体4E3的F（ab')2片段与多柔比星（ADR）人血清白蛋白毫微粒（ADR－HAS－NP）共价交联构建抗体F（ab')2片段靶向的载药免疫毫微粒（HAb18F（ab')2ADR-HSA-NP,4E3F（ab')2ADR-HSANP);采用玻片凝集试验，免疫荧光染色实验研究F（ab')2片段是否结合在毫微粒表面；采用花环形成实验，花环形成阻断实验，扫描电镜分别从光镜、电镜水平观察F（ab')2片段免疫毫微粒是否同人肝癌细胞株SMMC7721特异性结合；采用MTT比色分析法研究F（ab')2片段免疫毫微粒的体外细胞毒作用；采用皮下荷人肝癌裸鼠模型，经瘤体注射观察免疫毫微业的抗人肝癌作用。结果：F（ab')2片段免疫毫微粒圆球状，粒径1.2μm左右，免疫荧光染色阳性而ADR－HSA－NP为阴性，提示F（ab')2片段已偶联到ARD－HSA－NP表面；HAb18F（ab')2ADR－HSA－NP能有效结合于人肝癌细胞株SMMC－7721，该结合能被HAb18抗体的F（ab')2片段阻断，未见该免疫毫微粒与对照细胞（SW1116）有效结合，这些结果提示，HAb18F（ab')2ADR－HSA－NP能有效特异性结合人肝癌细胞。HAb18F（ab')2ADR-HSA-NP能有效杀伤人肝癌细胞株SMMC－7721，且呈剂量依赖性，而4E3F（ab')2ADR－HSA－NP无明显杀伤作用；经瘤体给药，HAb18F（ab')2ADR-HSA－NP能阻止肿瘤生长，其20d后的抑瘤率为67.5%，明显高于ADR－HSA－NP（55.1%)。结论：采用SPDP化学校联法能构建抗体F（ab')2片段靶向的载药免疫毫微粒；该免疫毫微粒对肿瘤具有良好的特异靶向结合性及杀伤作用。

Preparation and anti-tumor characteristics of ADR-loaded albumin nanoparticles directed by F(ab')2 fragment of anti- human hepatoma antibody