| 真核表达载体pcDNA3-CTLA41g的构建及体内表达 |
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| 引用本文： | 赵国华,许国岩. 真核表达载体pcDNA3-CTLA41g的构建及体内表达[J]. 中国组织工程研究与临床康复, 2009, 13(15): 2927-2930. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.15.027 |
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| 作者姓名： | 赵国华 许国岩 |
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| 作者单位： | 1. 辽宁省肿瘤医院,辽宁省沈阳市,110044
2. 解放军65735部队医院内科,辽宁省丹东市,118009 |
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| 基金项目： | 辽宁省科技厅博士科研启动基金 |
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| 摘 要： | 背景:CTLA-41g的制备过程比较复杂,单克隆抗体的价格比较昂贵,而且应用CTLA-41g单克隆抗体注射本身存在着血浆药物浓度不稳定的问题.目的:探讨Ctla41g表达质粒构建的可行性.设计、时间及地点:基因水平观察实验,于2005/2006在中国医科大学中心实验室完成.材料:雄性Wistar大鼠10只,近交系昆明小鼠10只.方法:提取Wistar大鼠总RNA,反转录成cDNA第1链,PCR扩增CTLA4基因,将其和真核表达载体pcDNA3酶切、连接.转化感受态菌DH5α,培养后挑取刚性克隆、提取质粒,酶切鉴定重组子、测序,最后转染近交系昆明小鼠,应用Westen Blot法检测血清CTLA41g水平.主要观察指标:构建的Ctla41g表达质粒基因序是否正确以及能否在小鼠体内进行蛋白表达.结果:对含有pcDNA3-CTLA4质粒的LB菌液进行鉴定测序,目的基因片断大小为288 bp,与Genebank上公布的CTLA4序列完全一致,质粒构建正确.利用阳性脂质体载体包被pcDNA3一CTLA41g转染小鼠,有3只在第7天血清检测CTLA41g阳性,显示pcDNA3-CTLA41g能够在鼠肌细胞内表达.结论:利用基因合成和重组技术成功构建了真核表达载体pcDNA3-CTLA41g,利用脂质体法成功的将pcDNA3-CTLA41g转染到鼠肌细胞内并进行表达.
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| 关 键 词： | 真核表达 共刺激信号 |
Construction and expression in vivo of eukaryotic expression vector pcDNA3-CTLA41g |
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| Zhao Guo-hua,Xu Guo-yan. Construction and expression in vivo of eukaryotic expression vector pcDNA3-CTLA41g[J]. Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research, 2009, 13(15): 2927-2930. DOI: 10.3969/j.issn.1673-8225.2009.15.027 |
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| Authors: | Zhao Guo-hua Xu Guo-yan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CTLA41g |
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