| 强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 韩雅玲,崔继福,康建,张效林,闫承慧.强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立[J].中国组织工程研究与临床康复,2008,12(42). |
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| 作者姓名： | 韩雅玲 崔继福 康建 张效林 闫承慧 |
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| 作者单位： | 解放军沈阳军区总医院心内科,辽宁省沈阳市,110016 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，辽宁省科技攻关项目 |
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| 摘 要： | 背景:前期研究发现,E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化,但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。目的:建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系,拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2008-03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。材料:强力霉素调控基因表达系统,3T3细胞系。方法:通过反转录-聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基因阻遏子(mCREG)cDNA序列;将mCREGcDNA序列亚克隆入pRev-TRE载体中,构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev-TRE-mCREG载体;分别经G418(新霉素)及潮霉素筛选表达pRev-Tet-On、pRev-TRE-mCREG的NIH3T3细胞克隆;反转录-聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达。主要观察指标:Westernblotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达。结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRev-TRE-mCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3-mCREG细胞克隆;反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0,0.01,0.1,1mg/L),NIH3T3-mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加。结论:成功建立强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系。
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| 关 键 词： | 阻遏蛋白 腺病毒E1A蛋白 小鼠 |
Establishment of a mouse NIH3T3 cells line expressing cellular repressor of E1A-stimulated genes regulated by doxycycline |
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| Han Ya-ling,Cui Ji-fu,Kang Jian,Zhang Xiao-lin,Yan Cheng-hui.Establishment of a mouse NIH3T3 cells line expressing cellular repressor of E1A-stimulated genes regulated by doxycycline[J].Journal of Clinical Rehabilitative Tissue Engineering Research,2008,12(42). |
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| Authors: | Han Ya-ling Cui Ji-fu Kang Jian Zhang Xiao-lin Yan Cheng-hui |
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