稳定表达人α-分泌酶adam10基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究 |
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引用本文: | 唐颖,胡小童,朱炳林,韩宇.稳定表达人α-分泌酶adam10基因启动子荧光素酶报告基因细胞系的构建研究[J].重庆医学,2017,46(28). |
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作者姓名: | 唐颖 胡小童 朱炳林 韩宇 |
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作者单位: | 重庆医科大学附属第一医院神经内科 400016 |
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摘 要: | 目的 构建携带adam10基因启动子的荧光素酶报告载体,筛选稳定表达细胞系并分析其活性.方法 提取人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y细胞)基因组DNA,以其为模板,PCR扩增adam10基因启动子并克隆至荧光素酶报告载体pGL4.17中,构建adam10基因启动子荧光素酶报告载体pGL4.17-adam10,将其转染SH-SY5Y细胞(无启动子的pGL4.17载体作阴性对照,带有CMV启动子的pGL4.51载体作阳性对照),经G418进行稳定表达株的筛选,用1μmol/L维甲酸处理细胞4d后检测其荧光活性.结果 成功扩增到438 bp的adam10基因启动子,pGL4.17-adam10经PCR和双酶切鉴定均正确.SH-SY5Y细胞被该载体转染后经G418筛选得到稳定表达adam10基因启动子的细胞株,经检测具有较强的转录活性;1μmol/L雏甲酸能诱导adam10基因启动子高效表达.结论 成功构建了人adam10基因启动子荧光素酶报告载体,adam10基因启动子在SH-SY5Y细胞中能稳定表达,为深入研究adam10基因的表达调控、多态性分析及其高通量药物筛选提供基础.
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关 键 词: | 去整合素和金属蛋白酶10 启动子 荧光素酶报告载体 高通量药物筛选 |
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