克隆高鸟嘌呤与胞嘧啶含量大鼠bcl-2基因的编码序列*☆

背景：卵巢颗粒细胞的过度凋亡是诱发卵巢早衰的根本途径，bcl-2基因具有抗细胞凋亡的特性。但实验表明，大鼠bcl-2基因序列中鸟嘌呤与胞嘧啶含量高达60.6%，应用常规聚合酶链反应方法，无法扩增出此基因。目的：拟克隆大鼠基因组中高鸟嘌呤与胞嘧啶含量的bcl-2基因编码序列。设计、时间及地点：开放性实验，于2007-05/12在中山大学生命科学院医药分子生物学实验室完成。材料：Wistar大鼠购自中山大学实验动物中心生产供应部，大肠杆菌DH5α由中山大学分子医药生物学实验室保种，载体pMD18-T 购自TakaRa大连宝生物技术公司。方法：采用改进的反转录-聚合酶链反应方法从大鼠脾脏组织中扩增出鸟嘌呤与胞嘧啶含量为60.6%的bcl-2 cDNA编码序列，将扩增产物克隆至pMD18-T载体中，用单菌活聚合酶链反应扩增快速鉴定DNA片段后进行序列分析。主要观察指标：①大鼠bcl-2基因cDNA克隆与纯化。②bcl-2基因cDNA与pMD18-T载体的连接、转化、鉴定阳性克隆及测序结果。结果：在筛选的阳性克隆中扩增到大鼠bcl-2基因，DNA序列分析结果与Genebank中序列相比，同源性为99%。结论：高鸟嘌呤与胞嘧啶含量基因的扩增属于困难聚合酶链反应，实验采用改进技术成功克隆了大鼠bcl-2基因，此技术也适用于其他富含鸟嘌呤与胞嘧啶的基因快速扩增。

Cloning and sequencing of rat bcl-2 gene riched guanine and cytosine