体外诱导儿童骨髓间质干细胞分化为神经细胞

目的探讨儿童骨髓间质干细胞诱导分化为神经干细胞及神经细胞的方法及生物学特征，为将来进一步研究及利用其实验治疗小儿脊髓栓系综合征及其他神经系统疾病动物模型奠定基础。方法取健康儿童骨髓离心初步分离骨髓间质干细胞，在α-MEM培养基中进行无分化培养12代进一步纯化扩增，加入预诱导液、诱导液进行定向诱导分化，逐日观察细胞形态变化，采用免疫组织化学技术对诱导后的细胞进行神经干细胞特异性抗原nestin、神经丝蛋白β-tublinⅢ和胶质纤维酸性蛋白（GFAP）表达的定性检测，观察其表达情况；并采用RT-PCR技术对不同时段神经干细胞特异性抗原nestin和神经生长因子受体Trk B（neurotrophic receptor tyrosine kinase B，Trk B）mRNA的表达进行检测，用上述两种技术手段，从不同角度和层面验证和初步探索BSMCs定向诱导分化为神经组织样细胞的细胞生物学和分子生物学特征。结果骨髓间质干细胞经过7d体外诱导，大约有35％的细胞发生形态学变化。免疫组化结果显示，细胞形态逐步发生变化并最终形成神经样的细胞，在诱导后30min表达神经干细胞特异性标志nestin抗原、7d时分别表达神经元特异性标志β-tublinⅢ抗原和星形胶质细胞特异性标志GFAP抗原。RT-PCR检测结果也表明，被诱导后5．5h在mRNA水平表达nestin，在6d时消失；而神经生长因子受体TrkB mRNA在诱导5．5h、6d时均表达。结论经离心及12代传代初步分离纯化的儿童骨髓间质干细胞在合适的诱导剂作用下体外可定向分化成神经元和神经胶质细胞。为进一步研究其生物学特性或探索治疗小儿脊髓栓系综合征及其他神经系统疾病动物模型提供基础和种子细胞。

Generation of neural cells from children bone marrow stromal cells in vitro