| 含HSV-TK基因的真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达 |
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| 引用本文： | 张阳德,孙颖.含HSV-TK基因的真核表达载体的构建及其在HepG2细胞中的表达[J].中国现代医学杂志,2003,13(22):6-11,21. |
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| 作者姓名： | 张阳德 孙颖 |
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| 作者单位： | 1. 中南大学卫生部肝胆肠外科研究中心,长沙,410008
2. 中国卫生部纳米生物技术重点实验室 |
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| 摘 要： | 目的 构建AFP增强子CMV启动子调控下的HSV -TK真核表达质粒用于肝细胞癌的靶向基因治疗。方法 采用PCR方法从HepG2细胞基因组DNA中扩增AFP基因增强子最小的功能片断 ,插入pcDNA3.1-LUC质粒的BglII位点 ,从而构建重组表达质粒 pAFP -LUC。HSV -TKcDNA全长序列替换pAFP -LUC质粒中EcoRI位点的LuciferasecDNA全序列构建重组表达质粒 pAFP -TK。质粒 pAFP -LUC采用脂质体法转染AFP阳性的肝癌细胞系HepG2及AFP阴性的非肝癌细胞系HeLa ,用Luciferase分析试剂盒分析Luciferase的表达情况。结果 PCR扩增所得AFP增强子片段的长度和序列通过琼脂糖凝胶电泳、DNA测序得到证实。采用限制性内切酶酶切及PCR方法证实质粒pAFP -LUC中插入的AFP增强子大小、位置及方向均正确。酶切后凝胶电泳分析证实HSV -TK已成功地定向克隆入真核表达载体中。Luciferase报道基因的表达受AFP增强子的调控 ,在AFP阳性肝癌细胞HepG2中高效表达 ,而在AFP阴性的HeLa细胞中表达很低 ,这种差异具有显著性 ,P <0 .0 5。结论 AFP增强子CMV启动子调控的HSV -TK真核表达质粒的构建及其在HepG2细胞中的特异性表达为肝细胞癌的靶向基因治疗提供了实验基础。
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| 关 键 词： | 肝细胞癌 HCC 单纯疱疹病毒胸苷激酶 HSV-TK 基因治疗 丙氧鸟苷 GCV |
Construction of eukaryotic expression plasmid carrying HSV-TK gene and its expression in HepG2 cells |
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| ZHANG Yang_de,SUN Ying National Hepatobiliary and Enteric Surgery Research Center,Central South University,Changsha Key Laboratory of Nanobiological Technology,Ministry of Health,PR.China,Changsha.Construction of eukaryotic expression plasmid carrying HSV-TK gene and its expression in HepG2 cells[J].China Journal of Modern Medicine,2003,13(22):6-11,21. |
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| Authors: | ZHANG Yang_de SUN Ying National Hepatobiliary and Enteric Surgery Research Center Central South University Changsha Key Laboratory of Nanobiological Technology Ministry of Health PRChina Changsha |
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| Institution: | ZHANG Yang_de,SUN Ying National Hepatobiliary and Enteric Surgery Research Center,Central South University,Changsha 410008 Key Laboratory of Nanobiological Technology,Ministry of Health,PR.China,Changsha 410008 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Hepatocellular Carcinoma (HCC) Herpes Simplex Virus Thymidine Kinase (HSV-TK) Gene therapy Ganciclovir (GCV) |
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