| NNMT基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 马春芳,张钧,谢鑫友,周美霞. NNMT基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达[J]. 浙江医学, 2006, 28(1): 10-12 |
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| 作者姓名： | 马春芳 张钧 谢鑫友 周美霞 |
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| 作者单位： | 310016,杭州,浙江大学医学院附属邵逸夫医院检验科 |
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| 摘 要： | 目的利用p GEX—4T-2表达系统表达制备尼克酰胺N-甲基转移酶（NNMT）抗原。方法根据NCBI核苷酸数据库编码为gi：12652950人NNMT cDNA序列，设计合成编码NNMT的DNA引物，并分别在5’端和3’端设计BamHI和XhoI位点，利用RT-PCR从人肝组织中克隆NNMT基因，经T—A克隆、亚克隆至p GEx-4T-2表达载体，重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR（DE3），经异丙基-β—D-硫代乳糖苷诱导表达，Glutathione Sepharose 4B亲和层析制备融合蛋白（GST-NNMT）。通过DNA测序来证实质粒p GEX-4T-2／NNMT的正确性，SDS—PAGE电泳以及Western—blot判断GST-NNMT蛋白的准确性。结果限制性内切酶和DNA测序结果表明，编码NNMT蛋白的DNA序列准确插入到 p GEX-4T-2多克隆位点，成功构建表达质粒p GEX-4T-2，NNMT。菌液超声破碎后，融合蛋白主要存在于裂解上清液中，表达量约占菌体总蛋白表达量的20％，每升菌液可表达融合蛋白约4．5mg。Western-blot证实制备的蛋白为GST-NNMT。结论成功地利用基因重组技术制备了NNMT，为制备抗NNMT单克隆抗体和ELISA试剂盒打下基础。
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| 关 键 词： | 尼克酰胺N-甲基转移酶 抗原 融合蛋白表达 |
| 收稿时间： | 2005-08-31 |
| 修稿时间： | 2005-08-31 |
Construction of recombinant NNMT plasmid and expression in E. coli |
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| MA Chunfang, ZHANG Jun, XIE Xinyou,et al.. Construction of recombinant NNMT plasmid and expression in E. coli[J]. Zhejiang Medical Journal, 2006, 28(1): 10-12 |
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| Authors: | MA Chunfang ZHANG Jun XIE Xinyou et al. |
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| Affiliation: | Sir Run Run Show Hospital, Zhejiang University School of Medicine, Hangzhou 310016, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Nicotinamide N-methyhransferase Antigen Fusion protein expression |
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