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| 大鼠肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与筛选 | |
| 引用本文： | 张方,施毅,辛晓峰,刘玉秀,宋勇,钱桂生,罗向东,赵明,李子玲.大鼠肺泡巨噬细胞酵母双杂交cDNA文库的构建与筛选[J].解放军医学杂志,2006,31(5):404-406. |
| 作者姓名： | 张方 施毅 辛晓峰 刘玉秀 宋勇 钱桂生 罗向东 赵明 李子玲 |
| 作者单位： | 1. 210002,南京,南京军区南京总医院呼吸内科 2. 210002,南京,南京军区南京总医院科研科 3. 第三军医大学新桥医院全军呼吸内科研究所 4. 第三军医大学西南医院烧伤研究所 |
| 摘 要： | 目的构建脂多糖(LPS)和地塞米松(Dex)作用后的肺泡巨噬细胞(AMs)酵母双杂交cDNA文库,探寻炎症条件下与糖皮质激素受体(GR)相互作用的蛋白质分子。方法用LPS(10mg/ml)和Dex(10-5mol/L)作用于原代培养的肺泡巨噬细胞4h后,从肺泡巨噬细胞中提取总RNA,再以SMARTⅢTM和CDSⅢoligo(dT)为引物进行PCR扩增,得到两端具有同源臂的双链cDNA,后者纯化后,与线性质粒pGADT7-Rec共转化感受态酵母菌AH109,二者在酵母细胞中同源重组成环形的有复制活性的cDNA文库质粒,收集在缺亮氨酸(Leu)培养板上筛选出所有克隆,即为AMs酵母双杂交文库菌。进而通过诱饵质粒pGBKT7-GR转化构建成功的文库菌,筛选与GR相互作用的蛋白分子。结果构建了具有基因多样性和库容量足够大的AMscDNA文库,共获得1.07×106个转化子,插入的双链cDNA片段的长度在0.3~1.5kb之间。筛选文库获得1个真阳性克隆,经测序和同源性比较证实该克隆为BAG-1。结论利用ClontechSMART技术成功构建了肺泡巨噬细胞的酵母双杂交cDNA文库;GR与BAG-1在酵母细胞中存在着相互作用。 |
| 关 键 词： | 受体 糖皮质激素 巨噬细胞 肺泡 基因文库 酵母双杂交 |
| 收稿时间： | 2006-01-09 |
| 修稿时间： | 2006-03-10 |
Construction and screening of cDNA library of alveolar macrophages |
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| Zhang Fang,Shi Yi,Xin Xiaofeng et al.Construction and screening of cDNA library of alveolar macrophages[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2006,31(5):404-406. | |
| Authors: | Zhang Fang Shi Yi Xin Xiaofeng |
| Institution: | Zhang Fang,Shi Yi,Xin Xiaofeng et al. Department of Respiratory,Nanjing Genaral Hospital of Nanjing Command,Nanjing 210002,China |
| Abstract: | |
| Keywords: | receptor glucocorticoid macrophages alveolar gene library yeast two-hybrid |
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