治疗性双质粒HBV DNA疫苗的体外转染表达与鉴定

目的：探讨治疗性双质粒HBV DNA疫苗转染COS-7细胞后目的基因的表达情况。方法：以脂质体转染试剂Lipofectamine^TM 2000介导，将带有preS2＋S基因的重组疫苗质粒pS2，S和带有hIL2＋hIFNγ融合基因的重组佐剂质粒pFP分别转染COS-7细胞，同时设立空质粒转染和未转染细胞为对照组，于转染后24，48，72，96h采用EL／SA法检测细胞培养上清的HBsAg、融合蛋白白细胞介素（IL-2）及干扰素（IFN-1）的表达，并测定融合蛋白的IL-2、IFN-γ活性，采用ECL Western blotting分析和鉴定目的蛋白preS2＋S、IL-2及IFN-γ的分子质量大小。结果：双质粒在转染COS-7细胞后不同时间均可进行分泌表达。且48h时目的蛋白的表达量达峰值，其中表达的融合蛋白具有较高的IL-2和IFN-γ的生物学活性，pS2．S和pFP的转染上清分别在30．6ku和110ku处有特异性阳性反应条带。结论：HBVDNA疫苗质粒pS2．S和佐剂质粒pFP在COS-7细胞的最佳表达时间是转染后48h，并鉴定双质粒表达产物的分子质量大小分别为30．6ku和110ku。

Expression and Identification of Therapeutic HBV DNA Vaccine in vitro