| 应用载体介导的RNAi技术抑制人胃癌和腹膜间皮细胞中TGF-β1的表达 |
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| 引用本文： | 吴涛,徐惠绵,吴晓华,姜成钢,于淼. 应用载体介导的RNAi技术抑制人胃癌和腹膜间皮细胞中TGF-β1的表达[J]. 世界华人消化杂志, 2005, 13(21) |
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| 作者姓名： | 吴涛 徐惠绵 吴晓华 姜成钢 于淼 |
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| 作者单位： | 1. 中国医科大学附属第一医院肿瘤科,辽宁省,沈阳市,110001
2. 秦皇岛市第一医院普外科,河北省,秦皇岛市,066000 |
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划973项目资助,No.G1998051203，辽宁省自然科学基金资助,No.2001225002-3~~ |
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| 摘 要： | 目的:应用载体介导的RNAi技术特异地干扰TGF-β1在人胃癌细胞株SGC-7901和腹膜间皮细胞中的表达.方法:使用线性化的pcPURβiCassette质粒构建针对TGF-β1基因的siRNA表达载体;hU6载体启动子下游插入含TGF-β1基因特异性序列的62mer寡核苷酸片段;采用胰蛋白酶-EDTA消化法,从人的腹膜组织中分离腹膜间皮细胞.采用形态学和链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连接法对培养细胞进行鉴定.将TGF-β1-siRNA载体转染人的上述两种细胞,以半定量RT-PCR和Western印迹方法检测转染后两种细胞中TGF-β1的表达水平的变化.结果:电泳、DNA测序证实合成的siRNA基因序列正确并已准确克隆入pcPURβiCassette载体.免疫组化染色结果显示腹膜间皮细胞角蛋白,波形蛋白表达阳性,而白细胞共同抗原(CD45),第Ⅷ因子相关抗原阴性.与各自未处理组比较,两种细胞TGF-β1-siRNA载体组的mRNA和蛋白均明显下降,并以蛋白下降更为明显.人胃癌细胞株SGC-7901TGF-β1蛋白下降约65.8%,人腹膜间皮细胞TGF-β1蛋白下降约61.8%.结论:载体介导的RNAi技术可成功地干扰TGF-β1在人胃癌细胞株SGC-7901和腹膜间皮细胞中的表达,为今后胃癌腹膜转移的基因靶向治疗奠定了基础.
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| 关 键 词： | 载体介导 RNAi TGF-β1 胃癌 腹膜间皮 |
RNAi-mediated gene silencing of transforming growth factor-β1 expression in human gastric cancer cell line SGC-7901 and peritoneal mesothelial cells |
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| Tao Wu,Hui-Mian Xu,Xiao-Hua Wu,Cheng-Gang Jiang,Miao Yu. RNAi-mediated gene silencing of transforming growth factor-β1 expression in human gastric cancer cell line SGC-7901 and peritoneal mesothelial cells[J]. World Chinese Journal of Digestology, 2005, 13(21) |
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| Authors: | Tao Wu Hui-Mian Xu Xiao-Hua Wu Cheng-Gang Jiang Miao Yu |
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| Affiliation: | Tao Wu,Hui-Mian Xu,Cheng-Gang Jiang,Miao Yu,Department of Oncology,the First Hospital of Chinese Medical University,Shenyang 110001,Liaoning Province,China Xiao-Hua Wu,Department of General Surgery,the First Hospital of Qinhuangdao 066000,Hebei Province,China |
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