| 高致病性禽流感H5N1NP蛋白与NIK蛋白相互作用初步研究 |
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| 作者姓名： | 李凯武 宋婷 周围 戴红梅 任洪广 周静 靳远 胡明达 黄志松 岳俊杰 梁龙 |
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| 作者单位： | 1. 安徽大学健康科学研究院,合肥 230601;军事医学科学院生物工程研究所,北京 100071;2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目 |
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| 摘 要： | 目的 研究高致病性禽流感H5N1(A/goose/Jilin/hb/2003)核蛋白(NP)与NF-κB 诱导激酶(NIK)是否存在蛋白质相互作用,探讨H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.方法 从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的总RNA中经逆转录和PCR获得NIK的全长cDNA双链片段,分别以其和pcDNA3-Flag-NP载体为模板,pCMV-Myc-N和pGEX-4T-1为载体,构建真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP (GST-NP),并通过免疫共沉淀及GST pull-down实验检测H5N1 NP和NIK之间是否存在相互作用,利用双荧光素酶报告基因系统检测H5N1 NP对NIK诱导的NF-κB转录活性的影响.结果 免疫共沉淀及GST pull-down实验表明,构建的真核表达载体pCMV-Myc-NIK和原核表达载体pGEX-4T-1-NP(GST-NP)均能正确表达,H5N1 NP与NIK之间存在相互作用;报告基因结果显示,H5N1 NP蛋白能明显抑制NIK诱导的NF-κB转录活性.结论 H5N1 NP与NIK之间存在蛋白质相互作用,并抑制NIK诱导的NF-κB转录活性,为进一步研究H5N1的致病机制打下基础.
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| 关 键 词： | 禽流感 流感病毒A型,H5N1亚型 核蛋白 NF-κB诱导激酶 蛋白质相互作用 |
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