| 摘 要： | 目的人源肌酸激酶u Mt CK具有良好的催化肌酸生成磷酸肌酸的活性,开发固定化u Mt CK酶法生成磷酸肌酸,实现其工业化应用价值。方法将异源表达的u Mt CK固定在纳米磁性材料Fe_3O_4@Histidine-Ni上,制备固定化酶Fe_3O_4@HistidineNi/uMtCK,并进行催化反应。与游离酶u MtCK比对酶学性质和动力学参数,测定固定化酶Fe_3O_4@Histidine-Ni/u Mt CK的重复使用次数。结果与游离酶u Mt CK相比,固定化酶Fe_3O_4@HistidineNi/u Mt CK的最适反应温度提高5℃,最适p H降低0.5个单位,在50℃、pH 7.5下孵育2 h,残余酶活为51%,而游离酶仅为27%;u Mt CK的KmCr为10.7mmol/L,为Fe_3O_4@Histidine-Ni/uMtCK的1.1倍; Fe_3O_4@HistidineNi/u Mt CK的kcat/KmCr值是5.3 L/(mmol·s),是u Mt CK的1.3倍;Fe_3O_4@Histidine-Ni/uMtCK在经历9次循环使用后,活力还能保持50%以上,显示了良好的稳定性和重复使用性。结论与u Mt CK相比,Fe_3O_4@Histidine-Ni/uMtCK具有良好的热稳定性和重复使用性,具有一定的工业化价值。
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