脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞：筛选理想浓度

背景：siRNA转染是完成RNA干扰的关键一步。目前用于心肌细胞的RNA干扰技术多以质粒为载体转染长链shRNA，其步骤复杂。脂质体转染化学合成短链siRNA是一种操作简便，低毒高效的转染方法，将其应用于心肌细胞转染，有利于RNA干扰技术的推广应用。 目的：筛选脂质体介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的最佳浓度，以及简单高效的RNA干扰操作方法。 方法：应用脂质体siPORTTM NeoFXTM转染试剂介导5，10，20，30 nmol/L的CY3-Negative siRNA转染心肌细胞，同时设立空白对照组，转染24 h后分别应用荧光显微镜，流式细胞仪检测转染效率和细胞凋亡率，筛选最优浓度。根据优化浓度转染PHB siRNA，48 h后检测蛋白表达验证转染效果。 结果与结论：随CY3-Negative siRNA浓度的增加，在荧光显微镜下观察到激发出红色荧光的细胞比例随之增加，流式细胞仪检测出各组平均转染效率也依次增高(P < 0.05)，其中30 nmol/L组转染效率最高(P < 0.05)，而各实验组与空白对照组之间的细胞凋亡率差异无显著性意义(P > 0.05)。将心肌细胞转染30 nmol/L 的PHB siRNA，48 h后PHB蛋白表达平均下降74.11%(P < 0.05)。实验结果表明，脂质体转染试剂siPORTTM NeoFXTM介导化学合成siRNA转染原代心肌细胞的理想浓度是30 nmol/L。

Liposomes-mediated chemosynthesis siRNA transfection to primary cardiomyocytes: Selection of an ideal concentration