组织蛋白酶L基因的RNA干扰真核表达载体的构建

目的:构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的RNA干扰真核表达载体.方法:根据GenBank数据库提供的CTSL基因核苷酸序列,设计并化学合成4对双链小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),瞬时转染卵巢癌细胞系A2780细胞,通过半定量RT-PCR检测各转染细胞CTSL表达筛选一个有效的siRNA序列.设计并合成能表达其小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs, shRNA)的DNA序列,并与psilence4.1-CMV-neo质粒定向连接,构建真核表达载体,DNA测序进行鉴定,并通过半定量RT-PCR验证其干扰效果.结果:构建CTSL的RNA干扰真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CTSL,经DNA测序证实与设计完全一致,通过半定量RT-PCR证实其能够沉默A2780细胞的CTSL基因表达.结论:CTSL基因RNA干扰真核细胞表达载体构建成功.