| 组织蛋白酶L基因的RNA干扰真核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 王素梅,李力,张玮,黎丹戎,唐步坚.组织蛋白酶L基因的RNA干扰真核表达载体的构建[J].广西医科大学学报,2008,25(1):83-86. |
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| 作者姓名： | 王素梅 李力 张玮 黎丹戎 唐步坚 |
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| 作者单位： | 广西医科大学附属肿瘤医院妇瘤科,南宁,530021 |
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| 摘 要： | 目的:构建组织蛋白酶L(CTSL)基因的RNA干扰真核表达载体.方法:根据GenBank数据库提供的CTSL基因核苷酸序列,设计并化学合成4对双链小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA),瞬时转染卵巢癌细胞系A2780细胞,通过半定量RT-PCR检测各转染细胞CTSL表达筛选一个有效的siRNA序列.设计并合成能表达其小发卡结构RNA(Small hairpin RNAs, shRNA)的DNA序列,并与psilence4.1-CMV-neo质粒定向连接,构建真核表达载体,DNA测序进行鉴定,并通过半定量RT-PCR验证其干扰效果.结果:构建CTSL的RNA干扰真核表达载体psilence4.1-CMV-neo-CTSL,经DNA测序证实与设计完全一致,通过半定量RT-PCR证实其能够沉默A2780细胞的CTSL基因表达.结论:CTSL基因RNA干扰真核细胞表达载体构建成功.
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| 关 键 词： | CTSL 真核表达载体 PsilencerTM4.1-neo RNA干扰 |
| 文章编号： | 1005-930X(2008)01-0083-04 |
| 修稿时间： | 2007年6月11日 |
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