P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段的表达、复性及活性研究(英文) |
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引用本文: | 刘雪婷,喻志红,何水连,陈安安,王丁丁,何颖,张志成,汪炬.P253R突变型FGFR2Ⅲc胞外段的表达、复性及活性研究(英文)[J].药物生物技术,2011(6):475-480. |
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作者姓名: | 刘雪婷 喻志红 何水连 陈安安 王丁丁 何颖 张志成 汪炬 |
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作者单位: | 暨南大学生物工程研究所;广东药学院生命科学与生物制药学院 |
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基金项目: | The ministry of science and technology of china(2009ZX09103-632);The national natural science foundation of china(91029742) |
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摘 要: | 成纤维细胞生长因子(Fibroblast growth factor,FGF)具有促进细胞增殖,诱导新生血管形成等重要生理作用,与肿瘤的发生及发展也有十分密切的关系。P253R是Apert综合症中发现的一种突变,可使FGFR2IIIc与FGF2亲和力大大增加,从而导致过度自分泌和旁分泌活性,引起骨骼发育异常。从人胎盘组织提取总RNA,通过RT-PCR扩增得到野生型FGFR2IIIc胞外段基因片段(wsFGFR2);再利用重叠延伸法以wsFGFR2基因片段为模板扩增得到P253R突变型FGFR2IIIc胞外段基因片段(msFGFR2,P253R是Apert综合征中发现的一种突变,可使FGFR2与FGF2亲和力大大增加)。msFGFR2基因克隆到pET3c载体,并在大肠杆菌BL21(DE3)中以包涵体的形式表达。经凝胶层析复性和肝素亲和层析纯化得到复性成功的活性蛋白,复性率为12%,纯度大于95%。MTT结果表明,msFGFR2能显著抑制FGF2促NIH3T3细胞增殖能力,并抑制前列腺癌DU145细胞的增殖,提示msFGFR2能有效阻断FGFs的细胞内信号通路,具有很好的产业化和临床应用前景。
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关 键 词: | 可溶性成纤维细胞生长因子受体2 包涵体 复性 转化生长因子-2 |
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