| RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 王海晶,杨和平,周向东.RNA干扰CA916798基因真核表达载体的构建与鉴定[J].第三军医大学学报,2008,30(1):23-26. |
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| 作者姓名： | 王海晶 杨和平 周向东 |
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| 作者单位： | 第三军医大学西南医院呼吸内科,重庆,400038 |
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| 摘 要： | 目的 构建CA916798基因RNA干扰(RNAi)的真核细胞表达载体.方法 以CA916798为靶基因,以pGenSil-l质粒为载体,设计构建重组体,根据GenBank数据库提供的CA916798基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计2条带发夹结构的核苷酸序列,克隆到空载体pGenSil-l中,转化DH5α菌株,提取质粒,进行限制性内切酶酶切鉴定和测序分析.用脂质体2 000将重组质粒转染A549/CDDP细胞并用G418筛选,MTT法测定药物敏感性并绘制细胞增殖曲线.结果 构建针对CA916798的pRNAi-CA916798shRNA,经限制性内切酶酶切、PCR和DNA测序证实与设计完全一致;在荧光显微镜下观察到A549/CDDP细胞表达绿色荧光蛋白(GFP)证实重组质粒已转染入细胞并用G418剔除了未转染质粒的细胞,1.0μg/ml顺铂作用后pRNAi-CA916798shRNA转染组细胞增殖受到明显抑制(P＜0.01).结论 成功构建CA916798基因的shRNA表达载体,并筛选出转染了CA916798shRNA的A549/CDDP细胞.
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| 关 键 词： | RNA干扰 真核表达载体 构建 转染 |
| 文章编号： | 1000-5404（2008）01-0023-04 |
| 收稿时间： | 2007-08-31 |
| 修稿时间： | 2007-09-17 |
Construction and identification of CA916798 eukaryotic expression vector for RNA interference |
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| WANG Hai-jing,YANG He-ping,ZHOU Xiang-dong.Construction and identification of CA916798 eukaryotic expression vector for RNA interference[J].Acta Academiae Medicinae Militaris Tertiae,2008,30(1):23-26. |
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| Authors: | WANG Hai-jing YANG He-ping ZHOU Xiang-dong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CA916798 |
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