| 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 蔡庆,朱美财,等.粒细胞巨噬细胞集落刺激因子重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达[J].空军总医院学报,1996,12(2):72-74. |
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| 作者姓名： | 蔡庆 朱美财 |
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| 作者单位： | 临床实验科 |
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| 摘 要： | 本研究通过反转录ＰＣＲ得到人ＧＭ-ＣＳＦ基因片段后，通过重组插入ｐＢＶ２２０载体质粒的ＥｃｏＲⅠ、ＢａｍＨⅠ之间，构建了重组表达质粒ｐｈＧＭ９１。借助计算机分析，优化了构建质粒的转译起始区，采取定点诱变以消除ＳＤ序列和ＡＴＧ区的强二级结构，提高了表达水平。将ＧＭ-ＣＳＦ基因进行序列测定，与文献报导完全一致，所对应的氨基酸序列与天然氨基酸序列一致。将带有表达质粒ｐｈＧＭ９１的ＤＨ５α菌在４２℃诱导，表达了预期的１５ＫＤ的蛋白，约占菌体总蛋白的２０％，并探讨了不同菌株对表达水平的影响。用ＭＴＴ法测定所表达的ＧＭ-ＣＳＦ生物活性，比活性可达到１×１０~７ＩＵ／ｍｇ，表明所表达的ＧＭ-ＣＳＦ具有生物学作用。
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| 关 键 词： | 粒细胞巨噬细胞集落刺激因子，大肠杆菌，聚合酶链反应，碱基序列，基因表达 |
High Level Expression ofHuman Recombinant GM-CSF in E. coli |
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| Cat Qing,et al.High Level Expression ofHuman Recombinant GM-CSF in E. coli[J].Journal of General Hospital of Air Force,PLA,1996,12(2):72-74. |
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| Authors: | Cat Qing |
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| Keywords: | GM-CSF Escherichia coli PCR Gene expression Base sequenct |
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