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| TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达 | |
| 引用本文： | 胡涛,王智宇,童强松,曾甫清,陈晓春,顾朝辉,郑丽端. TSEG-2基因真核表达载体的构建及其在细胞内的表达[J]. 中华实验外科杂志, 2010, 27(3). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2010.03.039 |
| 作者姓名： | 胡涛 王智宇 童强松 曾甫清 陈晓春 顾朝辉 郑丽端 |
| 作者单位： | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院泌尿外科,武汉,430022 2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院小儿外科,武汉,430022 3. 华中科技大学同济医学院附属协和医院病理科,武汉,430022 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金，新世纪优秀人才支持计划，教育部留学回国人员科研启动基金 |
| 摘 要： | 目的 构建睾丸特异表达基因2(TSEG-2)的真核表达载体,探讨TSEG-2在细胞中的表达及其生物学功能.方法 以小鼠睾丸组织cDNA为模版,设计携带HindⅢ和BamH Ⅰ酶切位点的引物序列,聚合酶链反应(PCR)扩增基因片段,克隆至携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体pEGFP-N1;在阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)的介导下,重组质粒转染体外培养的精母细胞株GC-2spd 48 h后,荧光显微镜下观察TSEG-2基因在细胞内的表达定位,噻唑蓝(MTT)比色法测定细胞生长活性,AO/EB荧光染色法、Hoechst 33258荧光染色法、Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,实时定量PCR测定Fas、bcl-2、bax表达水平.结果 成功构建了TSEG-2与EGFP的融合表达载体pEGFP-TSEG2,转染GC-2spd细胞后可见胞质内绿色荧光蛋白表达.转染pEGFP-TSEG2 48 h后,GC-2spd细胞生长抑制39.2%(P＜0.05),出现细胞凋亡形态学改变,凋亡率为28.3%(P＜0.05);GC-2spd细胞中Fas和bcl-2的表达分别下调17.9%、64.8%(P＜0.05),而bax的表达上调25.1%(P＜0.05).结论 成功构建TSEG-2基因的真核表达载体,能在精母细胞株中表达并促进细胞凋亡. |
| 关 键 词： | 睾丸特异表达基因2 真核表达载体 基因表达 脱噬作用 |
Construction of the eukaryotic expression vector of TSEG-2 and its expression in cultured cells |
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| HU Tao,WANG Zhi-yu,TONG Qiang-song,ZENG Fu-qing,CHEN Xiao-chun,GU Zhao-hui,ZHENG Li-duan. Construction of the eukaryotic expression vector of TSEG-2 and its expression in cultured cells[J]. Chinese Journal of Experimental Surgery, 2010, 27(3). DOI: 10.3760/cma.j.issn.1001-9030.2010.03.039 | |
| Authors: | HU Tao WANG Zhi-yu TONG Qiang-song ZENG Fu-qing CHEN Xiao-chun GU Zhao-hui ZHENG Li-duan |
| Abstract: | |
| Keywords: | Testis specific expressed gene 2 Eukryotic expression vector Gene expression Apoptosis |
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