| Smoothened shRNA载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响 |
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| 引用本文： | 陶雅军,毛俊,张晴晴,李连宏.Smoothened shRNA载体的构建及其对乳腺癌细胞增殖的影响[J].山东医药,2011,51(8):13-16. |
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| 作者姓名： | 陶雅军 毛俊 张晴晴 李连宏 |
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| 作者单位： | 大连医科大学,辽宁大连,116044 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目(30870968); 教育部高等学校博士学科点专项科研基金(200801610001) |
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| 摘 要： | 目的构建并筛选Smoothened（SMO）基因的RNAi表达质粒,了解Hedgehog信号通路影响乳腺癌细胞增殖的作用机制。方法以脂质体Lipofectamine^TM2000介导转染乳腺癌MCF-7细胞。转染后48 h,采用实时定量RT-PCR技术检测转染细胞中SMO基因mRNA的转录水平,筛选有效的SMO RNAi质粒,Western blot检测SMO蛋白在乳腺癌MCF-7细胞中的表达,CCK-8法比较转染前后乳腺癌细胞增殖变化,实时定量RT-PCR检测SMO短发夹状RNA（shRNA）对cyclinD1 mRNA表达的影响。结果 4个SMO shRNA表达载体SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3和SMO shRNA-4经测序鉴定证明插入正确。转染48 h后,与MOCK组相比,SMO shRNA-1、SMOshRNA-3、SMO shRNA-4组SMO mRNA表达量均下降（P=0.015、0.002、0.000）,其中转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞中SMO mRNA表达水平低于SMO shRNA-1、SMO shRNA-2、SMO shRNA-3组（P=0.007、0.000、0.046）。SMOshRNA-4干扰抑制效率为87%。Western blot可检测到SMO在MCF-7中的表达,干扰片段SMO shRNA-4的抑制效果较好。转染SMO shRNA-4的MCF-7细胞增殖受到明显抑制（P〈0.01）,转染SMO shRNA后cyclinD1 mRNA表达下降（P=0.000）。结论已成功构建并筛选出SMO基因的RNAi表达质粒,SMO shRNA对乳腺癌细胞增殖有明显的抑制作用,Hedgehog信号通路可通过活化cyclinD1诱导细胞恶性增殖。
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| 关 键 词： | Smoothened shRNA 载体构建 增殖 cyclinD1 |
Construction of Smoothened shRNA expression vector and effects on the proliferation of breast cancer cells |
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| TAO Ya-jun,MAO Jun,ZHANG Qing-qing,LI Lian-hong.Construction of Smoothened shRNA expression vector and effects on the proliferation of breast cancer cells[J].Shandong Medical Journal,2011,51(8):13-16. |
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| Authors: | TAO Ya-jun MAO Jun ZHANG Qing-qing LI Lian-hong |
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| Institution: | TAO Ya-jun,MAO Jun,ZHANG Qing-qing,LI Lian-hong(Dalian Medical University,Dalian 116044,P.R.China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Smoothened shRNA vector construction proliferation cyclinD1 |
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