CD44阳性人脐带间充质干细胞扰乱大鼠血小板稳态研究

目的 基于生物信息分析与动物实验探讨人脐带间充质干细胞（hUCMSCs）与机体血小板稳态的关系。方法 运用DisGeNET、GeneCards、STRING 11.5等数据库，分析hUCMSCs诱发血小板减少的靶点及通路。将SD大鼠随机区组分为5组：阴性对照组（0.9%氯化钠注射液）、溶媒对照（80mg·kg^-1白蛋白）组和hUCMSCs高、中、低剂量（1.0×107、5×106、2.5×106个·kg^-1，分别为临床等效剂量的10.0、5.0、2.5倍）组，每组6只，雌雄各半。每周按10mL·kg^-1尾iv1次，共4次，与临床拟用方法一致。全自动血液分析仪分析血小板相关的指标：血小板计数（PLT）、血小板压积（PCT）、血小板分布宽度（PDW）、平均血小板体积（MPV）；剖取大鼠胸骨，取骨髓，制备骨髓涂片，瑞特-吉姆萨复合染液染色，光学显微镜下计数全片巨核细胞总数、产血小板巨核细胞数；测量脾脏总长度；苏木精-伊红（HE）和过碘酸-雪夫（PAS）染色脾脏作组织病理学检查；实时荧光定量PCR（qRT-PCR）分析肝脏促血小板生成素（TPO）、血小板生成素受体（Mpl）、Krüppel样因子1（Klf1）、Friend白血病整合素1（FLI1）、GATA结合蛋白1（GATA1）mRNA变化。结果 hUCMSCs与血小板减少相关的靶点有209个，作用于158条信号通路，与血小板生成最密切的通路为造血细胞谱通路，包含了20个靶点。以平均连接度筛选出14个核心靶点：IL6、TNFRSF11A、CD34、KIT、IL4、CSF2、CSF3、IL3、IL2RA、TPO、EPO、TFRC、CD44、IL11。CD44既是核心靶点又是hUCMSCs阳性表面标志物。与阴性对照、溶媒对照组比较，hUCMSCs高、中、低剂量组PLT、PCT显著降低（P＜0.05），PDW、MPV差异无统计学意义；hUCMSCs组全片巨核细胞总数、产血小板巨核细胞数差异无统计学意义；hUCMSCs高、中剂量组脾脏长度显著增加（P＜0.05）；PAS染色见hUCMSCs高、中剂量组脾脏血小板储存增加；hUCMSCs高、中、低剂量组肝脏组织TPO、Mpl、KLF1 mRNA表达显著增加（P＜0.05），FLI1、GATA1 mRNA表达变化不显著。结论 CD44⁺hUCMSCs可能通过促脾脏吞噬血小板，增加血小板在脾脏中储存，使血液中PLT、PCT减少，从而扰乱血小板稳态。