| 大肠杆菌碱性磷酸酶在E.coli BL21(DE3)中的胞内可溶性表达 |
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| 引用本文： | 包剑铭,郭小帆,赵雪飞,李雨丽,梁艺旋,唐金宝.大肠杆菌碱性磷酸酶在E.coli BL21(DE3)中的胞内可溶性表达[J].中国生化药物杂志,2014(5). |
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| 作者姓名： | 包剑铭 郭小帆 赵雪飞 李雨丽 梁艺旋 唐金宝 |
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| 作者单位： | 1. 潍坊医学院药学与生物科学学院,山东潍坊,261053
2. 潍坊护理职业学院,山东青州,262500 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，山东省自然科学基金 |
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| 摘 要： | 目的 构建原核表达载体pEAP,在E.coil BL21(DE3)中实现大肠杆菌碱性磷酸酶(Escherichia coli alkaline phosphatase,EAP)的胞内可溶性表达,为进一步研究工程菌的大体积培养条件、提高其表达量提供理论基础.方法 以质粒pDAP2为模板扩增不含信号肽的EAP基因,克隆至pGreen-S质粒构建表达载体pEAP,以E.coli BL21(ED3)菌株表达EAP,采用SDS-PAGE及EAP酶活性测定对表达产物的可溶性及胞内定位进行分析;Ni2+亲和层析方式纯化目的蛋白并测定其比活力.结果 经PCR、双酶切及测序分析证实载体构建正确,所表达目的蛋白主要以可溶性形式存在于BL21(ED3)菌体细胞质,其相对分子量与理论值相符(47kD)且具有EAP催化活性;目的蛋白经His Trap亲和层析纯化后,其电泳纯度在90％以上,酶比活力可达358.6 U/mg.结论 成功构建pEAP质粒表达载体,目的蛋白在BL21(ED3)菌株胞内主要以可溶性形式表达,为进一步更经济、高效制备EAP奠定了一定的实验基础.
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| 关 键 词： | 大肠杆菌 碱性磷酸酶 细胞质 可溶性表达 |
Soluble expression of Escherichia coli alkaline phosphatase in prokaryotic cytoplasm of Escherichia coli BL21 (DE3) |
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| BAO Jian-ming,GUO Xiao-fan,ZHAO Xue-fei,LI Yu-li,LIANG Yi-xuan,TANG Jin-bao.Soluble expression of Escherichia coli alkaline phosphatase in prokaryotic cytoplasm of Escherichia coli BL21 (DE3)[J].Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics,2014(5). |
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| Authors: | BAO Jian-ming GUO Xiao-fan ZHAO Xue-fei LI Yu-li LIANG Yi-xuan TANG Jin-bao |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Escherichia coli alkaline phosphatase prokaryotic cytoplasm soluble expression |
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