| 钙网蛋白融合HBsAg基因重组腺病毒新型载体疫苗的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 张兰春,王宝红,王 芳,马春玲. 钙网蛋白融合HBsAg基因重组腺病毒新型载体疫苗的构建与鉴定[J]. 南京医科大学学报(自然科学版), 2011, 0(5): 624-628 |
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| 作者姓名： | 张兰春 王宝红 王 芳 马春玲 |
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| 作者单位： | 临沭县人民医院,山东 临沭 276700;临沂市中医院,山东 临沂 276002;南京医科大学第一附属医院医学检验科,江苏 南京 210029;山东医学高等专科学校检验系,山东 临沂 276002 |
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| 基金项目： | 国家自然基金（30901344）；江苏省现代病原生物学重点实验室开放课题（08bykf01)；山东省医药卫生科技发展计划项目（2009HW087);临沂市科技发展计划项目（201013067） |
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| 摘 要： | 目的:构建表达钙网蛋白(calreticulin,CRT)与乙型肝炎病毒表面抗原(hepatitis B surface antigen,HBsAg)融合基因重组腺病毒载体(Ad-CRT/HBsAg),为研发新型乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)治疗性疫苗奠定基础?方法: 采用腺病毒表达系统(ViraPowerTM Adenoviral Expression System)构建重组腺病毒表达载体?首先利用RT-PCR的方法扩增CRT基因,并进一步构建CRT与HBsAg基因融合重组的pJW4303表达载体,在构建过程中给融合基因加上特定的CACC接头,再克隆入载体pENTR/D-TOPO以获得入门克隆, 经PCR及测序鉴定正确后, 用重组酶(LR ClonaseTM Ⅱ Enzyme Mix)进行入门克隆与表达载体(pAd-CMV/V5-DEST)间的重组反应,以获得表达克隆Ad-CRT/HBsAg?表达克隆鉴定后,用限制性内切酶PacⅠ线性化后转染HEK293A包装细胞得到重组腺病毒?经过扩增后,用极限稀释法检测病毒滴度,用Western blot法检测Ad- CRT/HBsAg载体是否能正确表达目的蛋白?结果:构建的含有CRT/HBsAg融合基因的腺病毒表达克隆,经PCR和测序鉴定构建正确?重组表达克隆转染HEK293A细胞并扩增,获得的病毒滴度为2.68×1011 pfu/ml,且这个重组病毒载体能正确表达CRT/HBsAg融合蛋白?结论:成功构建了CRT/HBsAg融合基因重组腺病毒载体(rAd-CRT/HBsAg),为此重组载体用于治疗HBV慢性感染以及HBsAg阳性肝癌奠定基础?
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| 关 键 词： | 钙网蛋白 乙型肝炎病毒 乙型肝炎病毒表面抗原 腺病毒表达载体 治疗性疫苗 |
| 收稿时间： | 2011-01-04 |
Construction and characterization of a novel therapeutic vaccine of recombinant adenovirus vector containing calreticulin/HBsAg fusion gene |
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| ZHANG Lan-chun,WANG Bao-hong,WANG Fang and MA Chun-ling. Construction and characterization of a novel therapeutic vaccine of recombinant adenovirus vector containing calreticulin/HBsAg fusion gene[J]. Acta Universitatis Medicinalis Nanjing, 2011, 0(5): 624-628 |
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| Authors: | ZHANG Lan-chun WANG Bao-hong WANG Fang MA Chun-ling |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | calreticulin hepatitis B virus hepatitis B surface antigen adenovirus expression vector therapeutic vaccine |
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