mica基因的克隆及其在原核系统中的表达 |
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引用本文: | 和艳敏,陶苏丹,应燕玲,朱发明,吕杭军,严力行.mica基因的克隆及其在原核系统中的表达[J].中国实验血液学杂志,2010,18(5):1256-1259. |
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作者姓名: | 和艳敏 陶苏丹 应燕玲 朱发明 吕杭军 严力行 |
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作者单位: | 浙江省血液中心输血研究所,卫生部血液安全研究重点实验室,浙江杭州,310006 |
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基金项目: | 浙江省卫生厅科学研究基金 |
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摘 要: | 本研究构建mica基因原核表达系统并纯化MICA蛋白。利用外周血标本提取RNA,经RT-PCR获取mica基因cDNA。将mica cDNA经TOPO克隆连接构建克隆载体,然后将克隆重组载体和原核表达载体pET-28a经双酶切后进行连接构建重组表达载体,进而转染宿主菌E.coliBL21DE3进行表达。利用亲和层析的Ni-NTASpin纯化重组的MICA蛋白。结果表明:带有重组质粒pET-28a-mica的宿主菌经IPTG诱导表达后,以可溶性形式大量表达重组的MICA蛋白,经Ni-NTA Spin纯化后得到重组的MICA蛋白。结论:本研究构建了mica基因原核表达系统并纯化了MICA蛋白,为探讨MICA与移植免疫的关系奠定了基础。
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关 键 词: | MICA基因 基因克隆 原核表达 |
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