| 自建NK细胞表面受体KIR2DS1基因mRNA表达的方法及验证 |
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| 引用本文： | 王甜,李颖,胡星,张环环,陈璐瑶,鲍晓晶,史进方,何军. 自建NK细胞表面受体KIR2DS1基因mRNA表达的方法及验证[J]. 临床检验杂志, 2019, 0(11): 825-830 |
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| 作者姓名： | 王甜 李颖 胡星 张环环 陈璐瑶 鲍晓晶 史进方 何军 |
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| 作者单位： | 苏州大学附属第一医院临床检测中心，江苏苏州 215006,苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室，江苏苏州215006,苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室，江苏苏州215006,苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室，江苏苏州215006,苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室，江苏苏州215006,苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室，江苏苏州215006,苏州大学附属第一医院临床检测中心，江苏苏州 215006,苏州大学附属第一医院临床检测中心，江苏苏州 215006；苏州大学附属第一医院&江苏省血液研究所HLA配型实验室，江苏苏州215006 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金（81671549）; 江苏省医学创新团队与领军人才项目（CXTDB2017009）；江苏省社会发展重点项目临床前沿技术（BE2019656）。 |
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| 摘 要： | 摘要:目的：建立检测NK细胞表面免疫球蛋白样受体基因 KIR2DS1 mRNA表达水平的荧光定量PCR方法并评价其性能。 方法：以行异基因造血干细胞移植的供患者共57对为研究对象，针对 KIR2DS1 基因设计特异性引物及探针，构建TaqMan-MGB荧光定量PCR反应体系，并评价该实验方法的性能，包括：总符合率、重复性、灵敏度及仪器适用范围、技术人员再现性。 结果：以KIR-SSO基因定性分型法为金标准，通过检测其中35例样品，荧光定量PCR方法对 KIR2DS1 基因阳性及阴性检测率均为100%。在重复性试验中，选取Ct值分别为高、中、低值3个样品的批内、批间CV分别为0.09%～0.46%、0.71%～1.13%。该方法的灵敏度达102 copies/μL，且对拷贝数为102 copies/μL的3个样品进行5次重复试验的CV分别为5.37%、2.71%、5.51%。仪器比对结果显示，参比仪器ABI-7500与实验仪器LC-480之间的拟合直线回归方程为Y=0.973 6X+0.118 3（R2=0.961 9，R2＞0.95）。2名技术人员对10个 KIR2DS1 基因阳性样品的再现性比对试验结果显示其偏倚（%）均＜±5%。 结论：建立了TaqMan-MGB荧光定量PCR检测 KIR2DS1 mRNA表达水平的检测方法，其性能良好。
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| 关 键 词： | 杀伤细胞免疫球蛋白样受体；激活；基因；定量；聚合酶链反应 |
| 收稿时间： | 2019-09-10 |
| 修稿时间： | 2019-12-04 |
Establishment of a method for detection of mRNA expression of KIR2DS1 gene on the surface of NK cell |
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| Wang Tian,Li Yin,Hu Xing,Zhang Huanhuan,Chen Luyao,Bao Xiaojing,Shi Jinfang and He Jun. Establishment of a method for detection of mRNA expression of KIR2DS1 gene on the surface of NK cell[J]. Chinese Journal of Clinical Laboratory Science, 2019, 0(11): 825-830 |
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| Authors: | Wang Tian Li Yin Hu Xing Zhang Huanhuan Chen Luyao Bao Xiaojing Shi Jinfang He Jun |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | killer cell immunoglobulin-like receptor activation gene quantification polymerase chain reaction |
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