| hTERT启动子的克隆及其在端粒酶阳性肺癌细胞中的靶向转录活性研究 |
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| 引用本文： | 王艳萍,唐小军,陈晓禾,车国卫,朱大兴,孙芝琳,周清华. hTERT启动子的克隆及其在端粒酶阳性肺癌细胞中的靶向转录活性研究[J]. 四川大学学报(医学版), 2006, 37(4): 497-501 |
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| 作者姓名： | 王艳萍 唐小军 陈晓禾 车国卫 朱大兴 孙芝琳 周清华 |
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| 作者单位： | 四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041;四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041;四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041;四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041;四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041;四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041;四川大学华西医院,肺癌分子生物实验室,成都,610041 |
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| 摘 要： | 目的克隆人端粒酶催化亚单位（hTERT）启动子序列片段，并探讨hTERT启动子在肿瘤细胞中的靶向转录活性。方法用PCR方法克隆293细胞DNA hTERT 5＇端上游旁侧序列长约1．1kb的启动子片段，经测序无误后将其克隆入荧光素酶报告质粒pGL3-Basic的荧光素酶基因上游，构建pGL3-hTERTp重组质粒，瞬时转染肺癌细胞A549、SPC-A-1、LTEPα-2、NCI-H446、YTMLC-9、GLC-82、95D、A2以及正常成纤维细胞MRC-5，检测荧光素酶活性。并用RT-PCR和TRAP-ELISA方法分析各细胞hTERT mRNA的表达及其端粒酶活性。结果琼脂糖电泳显示PCR克隆的hTERT启动子片段长约1．1kb，DNA测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致，位于hTERT基因转录起始位点上游1126bp（-1126～-40），片段长度为1084bp；采用双酶切和PCR两种方法鉴定pGL3-hTERTp重组质粒，均显示构建成功；hTERT mRNA和端粒酶活性在肺癌细胞中呈不同水平的表达，而正常细胞则均为阴性；瞬时转染及荧光素酶活性检测实验显示，hTERT启动子片段在所有检测的肺癌细胞中均有高低不同的转录活性，在正常细胞MRC-5无转录活性。结论克隆的1084bp大小的hTERT启动子片段在hTERT mRNA和端粒酶阳性的肺癌细胞中有特异性的转录活性，hTERT启动子可能作为靶向性基因治疗的调控元件。
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| 关 键 词： | 人端粒酶催化亚单位 启动子 靶向转录 肺癌 |
| 收稿时间： | 2005-08-23 |
| 修稿时间： | 2005-12-08 |
Study on Cloning of hTERT Promoter and Its Targeting Transcriptional Activities in Telomerase-positive Lung Cancer Cells |
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| WANG Yan-ping,TANG Xiao-jun,CHEN Xiao-he,CHE Guo-wei,ZHU Da-xing,SUN Zhi-lin,ZHOU Qing-hua. Study on Cloning of hTERT Promoter and Its Targeting Transcriptional Activities in Telomerase-positive Lung Cancer Cells[J]. Journal of Sichuan University. Medical science edition, 2006, 37(4): 497-501 |
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| Authors: | WANG Yan-ping TANG Xiao-jun CHEN Xiao-he CHE Guo-wei ZHU Da-xing SUN Zhi-lin ZHOU Qing-hua |
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| Affiliation: | Laboratory of Lung Cancer Molecular Biology, West China Hospital, Sichuan University, Chengdu 610041, China. |
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| Abstract: | |
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