抗Ⅱ型胶原短肽（260-272）抗体ELISA测定方法的建立与初步应用

目的了解类风湿关节炎（RA）,其他自身免疫病和健康对照组血清抗Ⅱ型胶原短肽,即CⅡ（260-272）抗体水平,探讨其在RA疾病诊断和病情监测中的价值。方法将合成的CⅡ（260-272）短肽与牛血清白蛋白（BSA）耦联得CⅡ（260-272）-BSA复合物,用其作为抗原包被建立抗CⅡ（260-272）抗体的ELISA测定方法,经方法学考核后,对临床病例标本检测结果进行评价。结果建立的抗CⅡ（260-272）抗体的ELISA法实验结果具有较好的稳定性和特异性,其批内和批间变异系数分别为8.4%和9.6%,特异阻断抑制率最高达76.3%。临床检测结果发现抗CⅡ（260-272）抗体在RA中的阳性率为75.0%（30/40）,显著高于其他自身免疫病和健康对照组（P〈0.01）。以测定吸光度（A）0.213为临界值时,抗CⅡ260-272抗体对RA诊断特异性91.0%,阳性预测值63.8%,阴性预测值94.5%,阳性似然比8.33,阴性似然比0.275,Youden指数0.66。ROC曲线分析结果显示该抗体对RA诊断准确度为中等偏上水平（AUCROC值=0.890）。未发现抗CⅡ（260-272）抗体与类风湿因子（RF）水平相关（在13例RF阴性RA患者中,该抗体阳性10例,阳性率76.9%）,但抗CⅡ（260-272）抗体与抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体显著相关（P〈0.01）,且该抗体水平随患者临床症状的改善有逐渐降低趋势。结论成功建立抗CⅡ（260-272）抗体ELISA测定方法,用其检测抗CⅡ（260-272）抗体水平可作为RA疾病诊断和病情监测的一种新的参考指标。