一种新的编码霍乱毒素的丝状噬菌体CTAKΦ

目的 探讨介导霍乱弧菌毒素基因水平转移的一种独特的遗传结构。方法 从O139群霍乱弧菌菌株FJ97129上清中分离出丝状噬菌体颗粒CTAKΦ，并进行电镜观察。从丝状噬菌体颗粒CTAKΦ中纯化出DNA，并进行链型分析。对pCTAK进行酶谱分析。用ctxAB、zot引物对pCTAK进行PCR扩增检测，用RS1探针对pCTAK进行Southern blot检测；用pCTAK转化DH5α和IEM101得到DX29和4329，将pCTAK克隆于pUC18载体并转入DH5α得到UD29，用GM1－ELISA检测DX29、4329、UD29的CT表达。对pCTAK的ctxAB、zot基因片段进行测序，并用DNASTAR软件和BLAST算法，在国际互联网上对测序结果进行序列分析。结果 发现和分离了一种编码霍乱毒素的质粒pCTAK，它以稳定的高拷贝数存在于1株天然的O139霍乱弧菌FJ97129中；酶谱分析发现其明显不同于CTX元件酶谱，在CTX元件中相当保守的酶切位点：BglⅡ、EcoRⅤ、PstⅠ、EcoRⅠ，在pCTAK中没有切点。ctxAB、zot引物对pCTAK的PCR扩增检测呈阳性，RS1探针杂交呈阳性；pCTAK的ctxAB、zot基因序列与已报道的序列有很高的同源性。pCTAK能直接或经载体转化DH5α和IEM101并表达CT。从FJ97129培养上清中分离出丝状噬菌体颗粒CTAKΦ，电镜观察并计算其直径大小为7nm左右。其全基因组大小为8.5kb，为单链DNA。结论 发现了一种新的编码霍乱毒素的丝状噬菌体CTAKΦ。

A new type of filamentous phage CTAKΦ encodes cholera toxin