| EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒的制备及表达 |
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| 引用本文： | 彭光勇,姚堃,许琳,徐江英,谢芳艺.EB病毒潜伏期膜蛋白2A重组腺病毒的制备及表达[J].中国免疫学杂志,2002,18(3):155-158,161. |
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| 作者姓名： | 彭光勇 姚堃 许琳 徐江英 谢芳艺 |
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| 作者单位： | 1. 南京医科大学微生物与免疫学教研室,南京,210029
2. 南京军医学院生物基因工程中心,南京,210099 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金 (No .30 170 880 )，江苏省科委“九五”攻关课题基金资助项目 (No .BJ9810 0 ) |
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| 摘 要： | 目的 :构建EB病毒潜伏期膜蛋白 2A重组腺病毒 ,研究EB病毒相关肿瘤治疗性疫苗。方法 :利用RT PCR扩增出EB病毒B95 8株潜伏期膜蛋白 2A(LMP2A)全部编码蛋白的基因 ,并克隆至pGEM T载体中。并将LMP2AcDNA插入E1、E3区替代的腺病毒载体pAX1CW ,选择正确的克隆pAX1CW LMP2A与Ad5DNA 末端肽复合体共转染 2 93细胞 ,通过同源重组获得复制缺陷型的重组腺病毒。提取重组腺病毒转染的 2 93细胞DNA ,通过酶切初步鉴定。选择阳性克隆感染CV1细胞 ,通过流式细胞仪和激光共聚集显微镜分析LMP2A蛋白表达情况。结果 :挑选同源重组 17个克隆中有 9个为阳性克隆 ,扩增到的病毒滴度为 2 3× 10 8pfu/ml。用MOI =10 0的重组腺病毒感染CV1细胞 ,48h后在激光共聚焦显微镜下可见LMP2A蛋白表达于CV1细胞膜上 ,经流式细胞仪检测LMP2A蛋白表达阳性细胞数为 94 4 %。结论 :重组腺病毒能有效地介导LMP2A基因的表达 ,为进一步研究该基因功能及其工程疫苗打下了基础。
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| 关 键 词： | EB病毒 LMP2A基因 腺病毒载体 克隆与鉴定 基因转移 基因表达 |
| 文章编号： | 1000-484X(2002)03-0155-05 |
Generation and expression of Epstein-Barr Virus Latent membrane protein 2A recombinant adenovirus |
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| PENG Guang-Yong,YAO Kun,XU Lin et al.Generation and expression of Epstein-Barr Virus Latent membrane protein 2A recombinant adenovirus[J].Chinese Journal of Immunology,2002,18(3):155-158,161. |
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| Authors: | PENG Guang-Yong YAO Kun XU Lin |
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| Institution: | PENG Guang-Yong,YAO Kun,XU Lin et al.Department of Microbiology and Immunology,Nanjing Medical University,Nanjing 210029 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Epstein-Barr Virus LMP2A gene Adenovirus vector Cloning and identification Sequence analysis |
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