耐高三尖杉酯碱人SKM-1细胞系的建立及其生物学特性观察

目的 建立耐高三尖杉酯碱人SKM-1细胞系,初步探讨该细胞系的生物学特性及多药耐药机制.方法 通过较大剂量间断冲击逐渐增加药物浓度的方法培养人骨髓增生异常综合征转急性髓系白血病细胞系SKM-1细胞,建立耐高三尖杉酯碱的SKM-1细胞系,命名为SKM-1/HHT.光学显微镜下观察耐药细胞系和亲本细胞系的一般形态学变化,MTT法测定倍增时间和耐药指数,绘制生长曲线;利用流式细胞术检测细胞周期分布及细胞内柔红霉素含量;应用常规遗传学方法进行核型分析;采用荧光相对实时定量PCR方法检测多药耐药相关基因(mdr1及MRP)及topo-Ⅱa的表达.结果 历经7个月建立了耐药细胞系SKM-1/HHT.耐药细胞与亲本细胞的形态及免疫表型接近;耐药细胞核型与SKM-1细胞基本相同,但更为复杂,存在20、X、4、5、9、11号染色体差异;耐药细胞G1期细胞增多(64.04%对41.91%),S期细胞减少(34.92% 对53.53%),G2期细胞减少(1.04%对4.56%);耐药细胞对高三尖杉酯碱、长春新碱、柔红霉素、依托泊苷耐药性明显增加,耐药指数分别为17.94、8.75、5.99和13.76;耐药细胞内DNR荧光量明显低于亲本细胞(698±36 对858±54);耐药细胞mdr1表达水平明显增高,其2-ΔCt值为亲本细胞的20.1倍[(3.42±0.46)×10-2对(0.17±0.01)×10-2,P<0.05];MRP表达亦明显升高,2-ΔCt值为亲本细胞的3.56倍[(4.77±0.87)×10-3 对(1.34±0.56)×10-3,P<0.05];topo-Ⅱa基因表达在耐药细胞有所下降,耐药细胞与亲本细胞的2-ΔCt值之比为 0.619∶1[(1.91±0.30)×10-4对(3.08±0.21)×10-4,P<0.05].结论 建立了对高三尖杉酯碱耐药的SKM-1/HHT细胞系,其耐药机制主要涉及mdr1的过度表达而导致的细胞外排增强,MRP及topo-Ⅱa表达水平的改变可能也部分参与了这一过程.

Establishment of human homoharringtonine-resistant SKM-1 cell line and its biological characteristics