乙型肝炎病毒全基因在肝癌细胞中的转染与表达

目的 建立乙型肝炎病毒（HBV）复制状态模型。方法 体外连接HBV DNA获得6．4kb的双拷贝DNA片段，然后将其插入pcDNA3载体的EcoRV位点，通过聚合酶链反应（PCR）和酶切筛选获得头尾串联双拷贝HBV全基因重组真核表达质粒，再通过脂质体介导法转染肝癌细胞。结果 通过G418筛选，对阳性克隆细胞进行十二烷基硫酸钠－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）和Western免疫印迹分析，证明已将HBV全基因重组真核表达质粒转染至肝癌细胞并获得稳定表达。结论 通过脂质体介导法将HBV全基因转染至肝癌细胞，成功建立了HBV复制状态的细胞模型。