扩增bFGF的条件优化及其真核载体构建

目的 :优化采用PCR技术从PBR3 2 2 bFGF质粒扩增bFGF基因片段的条件并构bFGF真核表达载体 ,为研究bFGF基因转移在骨组织工程学中的应用提供研究基础。方法 :(1)在不同的模板量、Mg2 浓度、退火温度下经PCR扩增bFGF基因 ,琼脂糖凝胶电泳检测。 (2 )载体和PCR产物经EcoRI和HindⅢ酶切、纯化 ,T4连接酶连接 ,转化大肠杆菌 ,抗生素筛选重组质粒。结果 :(1)得到三个最佳参数为 :模板量为 2 μl(5 0 4μg/ml) ;Mg2 浓度为2 0mmol/L ;退火温度为 5 5℃。 (2 )酶切、PCR和DNA序列鉴定均证实插入片段的正确性。结论 :在此优化条件下经PCR反应得到了特异、高效和忠实的bFGF基因片段 ,并成功构建了bFGF真核表达载体。