| 人regucalcin和红色荧光蛋白融合基因的构建及表达 |
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| 引用本文： | 徐洪,胡亮,倪培华,吴洁敏,赵涵芳.人regucalcin和红色荧光蛋白融合基因的构建及表达[J].诊断学,2006,5(3):225-229. |
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| 作者姓名： | 徐洪 胡亮 倪培华 吴洁敏 赵涵芳 |
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| 作者单位： | 上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室,上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室,上海交通大学医学院检验系,上海交通大学医学院检验系,上海交通大学医学院生物化学与分子生物学教研室 上海200025,上海200025,上海200025,上海200025,上海200025 |
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| 基金项目： | 973国家基础研究项目(2004CB518804)，上海教委第四期重点基础学科基金(ZDXK2001) |
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| 摘 要： | 目的:构建人regucalcin(RGN)全长cDNA的真核表达载体pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo,观察RGN及红色荧光蛋白(DsRed)在人肾皮质近曲小管上皮细胞(HK-2细胞)中的表达。方法:RT-PCR技术扩增获得人HK-2细胞RGN全长cNDA,将扩增的产物进行T-A克隆,经酶切、DNA测序鉴定正确,将RGN基因酶切后构成pDsRed-RGN,再将RGN基因与DsRed一起酶切构建成pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo的真核表达重组质粒。用脂质体将重组质粒转染入HK-2细胞,激光共聚焦显微镜观察重组质粒的表达情况。结果:RT-PCR扩增获得人HK-2细胞,其RGNcDNA全长897bp,构建完成真核表达重组质粒pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo,经DNA测序与GenBank中的人RGNcDNA序列一致。经zeocin(zeo)筛选获得稳定表达重组质粒的单克隆细胞株。激光共聚焦显微镜观察到转染重组质粒的细胞中有红色荧光蛋白的表达。结论:本实验成功构建了pcDNA3.1-RGN-DsRed-zeo真核表达质粒,并发现其在HK-2细胞中表达。
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| 关 键 词： | 红色荧光蛋白 表达 重组质粒 钙结合蛋白 |
| 文章编号： | 1671-2870（2006）03-0225-05 |
| 收稿时间： | 2006-04-05 |
| 修稿时间： | 2006-04-05 |
Construction and expression of human regucalcin fused with red fluorescent protein gene |
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| XU Hong,HU Liang,NI Pei-hua,WU Jie-min,ZHAO Han-fang.Construction and expression of human regucalcin fused with red fluorescent protein gene[J].Journal of Diagnostics Concepts & Practice,2006,5(3):225-229. |
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| Authors: | XU Hong HU Liang NI Pei-hua WU Jie-min ZHAO Han-fang |
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| Institution: | a. Department of Biochemistry; b. Department of Medical Laboratory, Shanghai Jiaotong University School of Medicine, Shanghai 200025, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Red fluorescent protein Expression Recombinant plasmid Calcium-binding protein |
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