shRNA沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖与凋亡的影响 |
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引用本文: | 张士龙,曾甫清,彭世波,董继华,廖贵益,汪良.shRNA沉默基因DNMT1的表达对膀胱癌T24细胞增殖与凋亡的影响[J].华中科技大学学报(医学版),2009,38(2). |
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作者姓名: | 张士龙 曾甫清 彭世波 董继华 廖贵益 汪良 |
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作者单位: | 1. 华中科技大学同济医学院附属协和医院,泌尿外科,武汉,430022 2. 华中科技大学同济医学院附属协和医院,中心实验室,武汉,430022 |
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摘 要: | 目的 体外研究shRNA(short hairpin RNA)沉默基因DNMTl的表达对膀胱癌T24细胞增殖和凋亡的影响,初步探讨DNMT1在膀胱肿瘤形成过程中的作用机制.方法 实验分为空白对照组(给予脂质体)、HK组(含无效干扰序列的质粒)及pshRNA-DNMT1组;常规培养膀胱癌T24细胞株,用脂质体Lipofeetamine 2000将构建成功的重组质粒pshRNA-DNMT1转染进入T24细胞,然后进行RT-PCR、Western blot检测各组DNMT1 mRNA及蛋白质水平变化;进行MTT,Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞术检测各组T24细胞增殖和凋亡情况.结果 重组质粒pshR-NA-DNMT1成功转染进入膀胱癌T24细胞;经RT-PCR检测pshRNA-DNMT1组DNMT1 mRNA表达减少,24、48、72h的抑制率分别是28.44%、52.48%、70.91%;转染pshRNA-DNMT1后,T24细胞中DNMT1蛋白24、48和72 h的抑制率分别为24.27%、57.79%、69.74%;在MTT检测中,pshRNA-DNMT1组的细胞增殖抑制率在24、48、72 h分别为(4.34±0.76)%,(9.87±1.54)%和(13.78±1.93)%,与空白对照组比较各时间点差异均有极显著性意义(均P<0.01);转染24、48和72 h后,pshRNA-DNMT1组细胞凋亡率分别为(3.87±0.81)%、(8.69±1.23)%和(11.46±1.24)%,与空白对照组比较差异均有极显著性意义(均P<0.01).结论 重组质粒pshRNA-DNMT1能有效降低膀胱癌细胞中DNMT1基因mRNA及蛋白的表达,并在一定程度上抑制T24细胞的增殖和促进凋亡.
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关 键 词: | DNA甲基转移酶1基因 RNA干扰 细胞凋亡 细胞增殖 膀胱肿瘤 |
Influence of Silencing DNMTI with shRNA on Proliferation and Apoptosis of Bladder Cancer Cell Line T24 |
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