| 东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达 |
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| 引用本文： | 夏扬,胡玲玲,陈姣,卢悟广,颜怀江,霍介格,曹鹏.东亚钳蝎Na+通道毒素BmkNaTx12的基因克隆与重组表达[J].中国药科大学学报,2017,48(2):220-226. |
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| 作者姓名： | 夏扬 胡玲玲 陈姣 卢悟广 颜怀江 霍介格 曹鹏 |
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| 作者单位： | 南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室,南京中医药大学附属省中西医结合医院；江苏省中医药研究院细胞与分子生物实验室 |
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| 基金项目： | 2015年度公益性行业科研专项经费项目(No.201507002)；国家自然科学基金资助项目(No.81622048,No.81473377,No.81573837)；江苏省自然科学基金资助项目(No.BK20140049) |
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| 摘 要： | 利用野生东亚钳蝎毒腺构建cDNA文库，并通过序列比对确定了一条全新的Na+通道长链毒素BmkNaTx12并克隆出其全长cDNA序列。序列比对显示BmkNaTx12的序列与墨西哥毒蝎的β-毒素Cn12具有较高的结构相似性，通过同源模型构建并选取打分最高的模型得到BmkNaTx12的预测结构，经分子动力学优化发现蛋白结构在300 ns趋于稳定，而蛋白20、35、52个氨基酸处的波动很可能由于这些氨基酸所处位置在loop区域导致。进一步构建了BmkNaTx12-Fc融合蛋白重组表达系统，通过Western blot技术确定重组蛋白最佳表达时间，并在HEK293细胞中成功表达出BmkNaTx12-Fc融合蛋白。经蛋白A亲和色谱纯化后获得的重组融合蛋白经SDS-PAGE凝胶电泳及高效液相鉴定后纯度高达95%。此外，全细胞膜片钳实验结果显示:BmkNaTx12-Fc在1 μmol/L浓度下能增大20% Nav1.7峰电流。研究结果为后续的生物学功能研究奠定了理论基础。
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| 关 键 词： | 东亚钳蝎 蝎毒素 基因克隆 表达 Na+通道 |
Cloning and expression of recombinant BmkNaTx12, a new voltage-gated sodium channel from scorpion Buthus martensii Karsch |
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| XIA Yang,HU Lingling,CHEN Jiao,LU Wuguang,YAN Huaijiang,HUO Jiege and CAO Peng.Cloning and expression of recombinant BmkNaTx12, a new voltage-gated sodium channel from scorpion Buthus martensii Karsch[J].Journal of China Pharmaceutical University,2017,48(2):220-226. |
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| Authors: | XIA Yang HU Lingling CHEN Jiao LU Wuguang YAN Huaijiang HUO Jiege and CAO Peng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Buthus martensii Karsch scorpion toxin gene cloning expression Na+ channel |
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