| 抑制丙型肝炎病毒 NS5A基因表达的shRNA系统的构建及意义 |
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| 引用本文： | 苏秀芬,姜艳芳,王峰,牛俊奇,唐彤宇.抑制丙型肝炎病毒 NS5A基因表达的shRNA系统的构建及意义[J].吉林大学学报(医学版),2009,35(3):570-573. |
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| 作者姓名： | 苏秀芬 姜艳芳 王峰 牛俊奇 唐彤宇 |
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| 作者单位： | 吉林大学第一医院感染症科,吉林 长春130021 |
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| 基金项目： | 卫生部博士点专项基金 |
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| 摘 要： | 目的：构建抑制丙型肝炎病毒 NS5A基因(HCV NS5A)表达的短发夹RNA(shRNA)真核表达载体系统，观察其对HCV NS5A蛋白表达的抑制作用。方法：根据HCV NS5A基因已知序列,设计3段19个碱基的HCV NS5A特异性靶序列,合成两对63 bp并含有编码shRNA序列的寡核苷酸,双链退火后,克隆到经过BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切后线性的pSilencerTM 3.1-H1neo载体的H1启动子下游,重组构建RNA干扰(RNAi)质粒，进行电泳，将3个不同的RNAi质粒和阴性对照质粒分别与HCV NS5A真核表达质粒共转染正常肝细胞HL-7702细胞系，用Western blotting印迹法鉴定 NS5A蛋白表达。结果：对重新构建的pSilencerTM3.1-H1neoHCV NS5A- R1、R2、R3质粒进行测序，与设计的序列完全相同；3个质粒电泳均在4 348 bp处出现特异性条带；Western blotting印迹法测得R1、R2和R3的 NS5A蛋白未见明显条带，阴性对照质粒 NS5A蛋白在相对分子质量5 600处出现条带。结论：设计合成的3个不同位点的63个碱基均成功插入到预计位点,并且序列完全正确，对HCV NS5A基因表达有特异性抑制作用。
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| 关 键 词： | 丙型肝炎病毒NS5A基因 短发夹RNA RNA干扰 |
| 收稿时间： | 2008-05-08 |
Construction of shRNA RNAi systeminhibiting HCV NS5Agene expression and significance |
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| SU Xiu-Fen,JIANG Yan-Fang,WANG Feng,NIU Dun-Ai,TANG Tong-Yu.Construction of shRNA RNAi systeminhibiting HCV NS5Agene expression and significance[J].Journal of Jilin University: Med Ed,2009,35(3):570-573. |
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| Authors: | SU Xiu-Fen JIANG Yan-Fang WANG Feng NIU Dun-Ai TANG Tong-Yu |
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| Abstract: | Construction of shRNA RNAi system inhibiting HCV NS5A gene expression and significance |
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