脱氧尿嘧啶核苷酸掺入量对尿苷酶抗污染效果的影响

目的 了解脱氧尿嘧啶核苷酸（dUTP)掺入量与尿苷酶（UDG）抗污染的关系。方法 通过聚合酶链反应将50％ dUTP和全dUTP掺入HCV cDNA，并观察UDG的抗污染效果。结果 0．05U、0．1U、0．2U的UDG37℃消化60min,PAGE检测可抗10^-1－10^-8 50％ dU-DNA模板污染。0．1U UDG 37℃ 10min能抗10^-6,20min-30min可抗10^-5,PAGE虽阴性，但DNA－EIA杂交A值0．617，仍为阳性；40min可抗10^-3，未经杂交证实。37℃消化20min电泳检测可抗10^-1-10^-8全dU-DNA污染，DNA－EIA杂交A值在0．005－0．049均为阴性。结论 本文研究结果证实，用50％ dU-DNA为模板，37℃ 10-20min时，抗污染效果较差，需增加抗污染时间。应用全dU-DNA为模板时，可获得良好的抗污染效果。