小鼠CD200基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的：构建携带小鼠 CD200 基因的重组腺病毒载体，并鉴定其在小鼠胰腺内皮细胞（mile sven 1，MS1）中mCD200基因的表达情况。方法：mCD200 基因亚克隆至腺病毒穿梭质粒pYr-adshuttle-4，获得重组质粒 pYr-ads-4-mCD200。从该重组质粒上利用LR（attL×attR）特异性同源重组的方法，将 mCD200 表达框构建至腺病毒骨架质粒pAd/PL-DEST上，获得的重组腺病毒质粒经PacⅠ酶切，转染HEK293细胞，包装成重组腺病毒rAd-4-mCD200，并用酶切和PCR等鉴定。采用TCID 50（tissue cell infectious dosage 50，TCID50）法测定重组腺病毒滴度。同时在HEK293细胞中进行病毒扩增，并感染小鼠内皮细胞MS1，通过荧光显微镜、real-time PCR检测MS1中小鼠CD200基因的表达。结果：PCR鉴定重组腺病毒证实重组腺病毒rAd-4-mCD200 构建成功；扩增后检测病毒滴度约为109~1010 pfu/ml；荧光显微镜及real-time PCR检测发现该重组腺病毒能在MS1细胞中高效的表达。结论：构建的重组腺病毒 rAd-4-mCD200在MS1细胞中成功表达mCD200基因，为下一步开展关于CD200 基因免疫抑制调节等相关研究奠定了基础。

Construction and identification of recombinant adenovirus vector containing mouse CD200 gene