重组人干细胞因子双体分子融合蛋白的构建、原核表达及其分子结构特性预测

目的：设计并构建重组人干细胞因子的双体分子(BiSCF)融合蛋白并在原核中表达，预测该新型BiSCF融合蛋白的分了结构特性。方法：采用分子克隆方法分别构建SCF单体分子与BiSCF的原核表达载体pET32／SCF和pET32／BiSCF，并在大肠杆菌中进行表达，表达产物以Western BLot加以鉴定：采用生物信息学方法，以DS Gene1．1和ProtScale软件对该融合蛋白的结构特征诸如二级结构、等电点、柔性、抗原性及亲水性进行模拟分析。结果：首次成功构建BiSCF双体分子pET32／BiSCF的原核表达载体，并经NcoⅠ和NotⅠ双酶切电泳及测序证实。通过转化origami^TM(DE3)感受态菌及IPTG诱导获得了高效表达，表达产量在40％以上：Western Blot显示表达产物能与抗SCF多克隆抗体特异性结合。对BiSCF双体分子融合蛋白的结构特性预测表明，BiSCF双体分子融合蛋白中的两个SCF单体分子其等电点、抗原性及亲水性均无显著改变，接头处具有高柔性。与SCF的原始序列相比，BiSCF的一级结构中有2个氨基酸发生了改变：二级结构中除插入的接头为无规卷曲外，原来的α螺旋和β片层均无改变。结论：本研究所构建表达的SCF单体和BiSCF双体分子均可在大肠杆菌中获得高效表达，BiSCF双体分子的结构预测符合我们的设计要求。为进一步深入研究新型BiSCF双体分子融合蛋白的生物学特性奠定了基础。