| 抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究 |
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| 引用本文： | 黄品秀,李蓉,林洪波,赵善飞,刘波澜. 抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究[J]. 生殖医学杂志, 2013, 22(2): 124-128 |
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| 作者姓名： | 黄品秀 李蓉 林洪波 赵善飞 刘波澜 |
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| 作者单位： | 黄品秀 (北京大学深圳医院生殖医学科,深圳518036;广西省柳州市妇幼保健院生殖健康助孕中心,广西柳州545001)； 李蓉 (北京大学深圳医院生殖医学科,深圳,518036)； 林洪波 (北京大学深圳医院生殖医学科,深圳,518036)；赵善飞 (北京大学深圳医院生殖医学科,深圳,518036)； 刘波澜 (北京大学深圳医院生殖医学科,深圳,518036)； |
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| 摘 要： | 目的研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础。方法采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GV期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量。同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态。结果 RB1在小鼠GV期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GV期的2倍,差别具有统计学意义(P<0.05)。RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化。GV期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化。结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GV～MⅡ)中尚未发生甲基化。
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| 关 键 词： | 胚胎植入 遗传学 卵母细胞 RB1 甲基化 |
Expression and methylation status of imprinted tumorsuppressor gene RB1 in different stages oocytes of mice |
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