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阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析
引用本文:王虹,李萌,马东明,叶鹏,詹若挺,杨锦芬. 阳春砂萜类合酶AvTPS1启动子的克隆及其活性分析[J]. 中草药, 2019, 50(9): 2181-2187
作者姓名:王虹  李萌  马东明  叶鹏  詹若挺  杨锦芬
作者单位:广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心, 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学), 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006,广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心, 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学), 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006,广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心, 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学), 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006,广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心, 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学), 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006,广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心, 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学), 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006,广州中医药大学中药资源科学与工程研究中心, 岭南中药资源教育部重点实验室(广州中医药大学), 国家中成药工程技术研究中心南药研发实验室, 广东 广州 510006
基金项目:国家自然科学基金青年基金项目(81303163);广东省高等学校优秀青年教师培养计划(Yq2013042)
摘    要:目的获得药用植物阳春砂Amomumvillousm的萜类合酶基因Av TPS1的启动子并进行活性分析。方法从阳春砂叶片基因组DNA(g DNA)中克隆获得Av TPS1基因,再通过FPNI-PCR的方法从阳春砂叶片g DNA中克隆Av TPS1的启动子并进行序列分析,构建由该启动子驱动β-葡萄糖苷酸酶基因(GUS)的重组表达载体p CAM-Av TPS1p,利用农杆菌介导法注射侵染烟草Nicotianabenthamiana叶片进行瞬时表达来验证Av TPS1启动子的活性。结果获得Av TPS1的g DNA序列长度为2444 bp,经过序列比对发现Av TPS1含有7个外显子和6个内含子;通过FPNI-PCR成功获得568bp的Av TPS1启动子序列,其含有10种顺式作用元件,包括保守元件TATA-box和CAAT-box,以及可被转录因子MYC结合的G-box等;通过GUS染色发现Av TPS1启动子启动了GUS基因的表达,使转基因烟草叶片呈现蓝色。结论 Av TPS1启动子被成功克隆,且通过实验验证其具有启动基因表达的功能,为进一步研究Av TPS1在萜类合成途径的功能及其受转录因子调节的机制奠定了基础。

关 键 词:AvTPS1  启动子  阳春砂  瞬时表达  FPNI-PCR
收稿时间:2018-11-08

Cloning and activity analysis of AvTPS1 promoter of terpene synthase from Amomum villousm
WANG Hong,LI Meng,MA Dong-ming,YE Peng,ZHAN Ruo-ting and YANG Jin-fen. Cloning and activity analysis of AvTPS1 promoter of terpene synthase from Amomum villousm[J]. Chinese Traditional and Herbal Drugs, 2019, 50(9): 2181-2187
Authors:WANG Hong  LI Meng  MA Dong-ming  YE Peng  ZHAN Ruo-ting  YANG Jin-fen
Affiliation:Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan(Guangzhou University of Chinese Medicine), Ministry of Education Joint Laboratory of National Engineering Research Center for Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Guangzhou 510006, China,Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan(Guangzhou University of Chinese Medicine), Ministry of Education Joint Laboratory of National Engineering Research Center for Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Guangzhou 510006, China,Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan(Guangzhou University of Chinese Medicine), Ministry of Education Joint Laboratory of National Engineering Research Center for Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Guangzhou 510006, China,Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan(Guangzhou University of Chinese Medicine), Ministry of Education Joint Laboratory of National Engineering Research Center for Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Guangzhou 510006, China,Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan(Guangzhou University of Chinese Medicine), Ministry of Education Joint Laboratory of National Engineering Research Center for Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Guangzhou 510006, China and Research Center of Chinese Herbal Resource Science and Engineering, Guangzhou University of Chinese Medicine;Key Laboratory of Chinese Medicinal Resource from Lingnan(Guangzhou University of Chinese Medicine), Ministry of Education Joint Laboratory of National Engineering Research Center for Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Guangzhou 510006, China
Abstract:
Keywords:AvTPS1  promoter  Amomum villousm Lour.  transient expression  FPNI-PCR
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