| 质谱技术鉴定组织型激肽释放酶脑相关蛋白的研究 |
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| 引用本文： | 王伟,高秀兰,朱健,徐兵,苏敬敬.质谱技术鉴定组织型激肽释放酶脑相关蛋白的研究[J].现代中西医结合杂志,2014(28):3079-3083,3089. |
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| 作者姓名： | 王伟 高秀兰 朱健 徐兵 苏敬敬 |
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| 作者单位： | 上海市第九人民医院;山东省滨州市人民医院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金委青年项目(81200941) |
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| 摘 要： | 目的采用质谱技术鉴定组织型激肽释放酶(TK)的脑相关蛋白。方法将含全长、无信号肽的TK基因质粒转染生物素标记Neuro-2a细胞,细胞裂解液用兔源性抗GFP抗体进行免疫共沉淀,特异性识别生物素的链亲和素-辣根过氧化物酶进行检测;将纯化的TK蛋白与大鼠脑组织抽提上清液作用后进行免疫共沉淀,裂解蛋白进行SDS-PAGE电泳银染;将上述电泳所得差异蛋白切胶酶解打质谱后分析数据;RT-PCR检测缺氧再复氧的Neuro-2a细胞内源性差异蛋白在TK处理后的表达变化。结果 GFP-TK-full转染组较GFPTK-no和GFP转染组出现2条差异蛋白条带,分子量为64 kDa和49 kDa;银染凝胶电泳显示,用抗TK抗体免疫共沉淀后有一分子量约为64 kDa差异蛋白;质谱鉴定出19种差异蛋白;TK浓度依赖性上调Homer1b/c和Flotillin-2的mRNA表达。结论质谱鉴定结果显示与TK相关的脑蛋白分子量在40~65 kDa。TK的作用机制很可能与Homer1b/c和Flotillin-2有关。
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| 关 键 词： | 组织型激肽释放酶 质谱技术 生物素 免疫共沉淀 Homer1b/c |
Identification of the related proteins of tissue kallikrein in brain using mass spectrometry |
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| Wang Wei;Gao Xiulan;Zhu Jian;Xu Bing;Su Jingjing.Identification of the related proteins of tissue kallikrein in brain using mass spectrometry[J].Modern Journal of Integrated Chinese Traditional and Western Medicine,2014(28):3079-3083,3089. |
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| Authors: | Wang Wei;Gao Xiulan;Zhu Jian;Xu Bing;Su Jingjing |
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| Institution: | Wang Wei;Gao Xiulan;Zhu Jian;Xu Bing;Su Jingjing;Shanghai Ninth People’s Hospital;The People’s Hospital of Binzhou; |
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