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| 内质网滞留型抗CyclinD1胞内抗体在HeLa细胞中的表达分析 | |
| 引用本文： | 周立宏,朱迅,田宇,陈勇,曹玉华,冯晶,李桂英. 内质网滞留型抗CyclinD1胞内抗体在HeLa细胞中的表达分析[J]. 中国实验诊断学, 2008, 12(7) |
| 作者姓名： | 周立宏 朱迅 田宇 陈勇 曹玉华 冯晶 李桂英 |
| 作者单位： | 1. 分子酶学工程教育部重点实验室(吉林大学),吉林,长春130021 2. 吉林大学基础医学院免疫学教研室,吉林,长春130021 3. 吉林大学中日联谊医院,神经外科,吉林,长春130033 |
| 基金项目： | 国家自然科学基金 , 吉林省科技发展计划 , 吉林省杰出青年科学基金 |
| 摘 要： | 目的 构建内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体并鉴定其在肿瘤细胞中的表达活性。方法 利用PCR技术将细胞内质网滞留信号及E-tag检测标签引入抗CyclinD1人源单链抗体，获得抗CyclinD1胞内抗体（AD5E）基因片段，通过分子克隆技术，构建重组真核表达载体pcDNA3．1-AD5E，限制性内切酶分析及DNA测序验证其序列及读码框正确后，利用脂质体介导法转染HeLa细胞，RT-PCR和间接免疫荧光实验分析该胞内抗体在肿瘤细胞中的表达活性。结果 限制性内切酶分析及DNA测序发现，正确引入细胞内质网滞留信号和E-tag检测标签序列，该胞内抗体片段为876bp。RT-PCR及免疫荧光实验结果显示，仅在转染胞内抗体基因的HeLa细胞中存在该胞内抗体的表达，并且主要分布在细胞质区域。结论 我们成功构建了在肿瘤细胞中能够有效表达的内质网滞留型的抗CyclinD1胞内抗体。 |
| 关 键 词： | CyclinD1 胞内抗体 表达 肿瘤 内质网 胞内抗体 HeLa cells 细胞质 表达分析 有效表达 区域 分布 存在 抗体基因 显示 免疫荧光实验 抗体片段 发现 结果 实验分析 间接免疫荧光 转染 脂质体介导法 框正 |
Expression of endoplasmic reticulum-retained anti-cyclin D1 intrabody in HeLa cells |
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