汉防己甲素对TGF-β1诱导的MRC-5细胞中Col-I及FN表达的影响

目的:探讨汉防己甲素(Tet)对人转化生长因子-β1(TGF-β1)刺激的人胚肺成纤维细胞MRC-5的影响。方法:不同质量浓度的TGF-β1(0,2. 5,5,10,20,40μg·L~(-1))作用于MRC-5细胞,应用细胞增殖与毒性检测法(CCK-8)检测TGF-β1对MRC-5细胞的增殖毒性,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测MRC-5细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)及波形蛋白(Vimentin)表达水平的变化,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测MRC-5细胞上清液中I型胶原(Col-I)及纤维黏连蛋白(FN)表达水平的变化,以筛选出TGF-β1活化MRC-5细胞的适宜浓度。结合筛选出的TGF-β1的浓度条件,与不同浓度的Tet(0,2. 5,5,10,20,40μmol·L~(-1))共同作用于MRC-5细胞,再次应用CCK-8法筛选TGF-β1及Tet共培养对MRC-5细胞的安全浓度,Western blot检测MRC-5细胞中α-SMA及Vimentin表达水平的变化,ELISA检测MRC-5细胞上清液中Col-I及FN表达水平的变化。结果:与空白组比较,给药24 h时,20μg·L~(-1)及40μg·L~(-1)的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P0. 05),给药48 h时,10,20,40μg·L~(-1)的TGF-β1对MRC-5细胞有毒性作用(P0. 05);加入Tet培养24 h时,对MRC-5细胞的半数抑制浓度(IC50)值为14. 07μmol·L~(-1),培养48 h时,IC50值为7. 51μmol·L~(-1);与空白组比较,5μg·L~(-1)的TGF-β1刺激MRC-5细胞时,细胞中α-SMA,FN及Col-I的相对含量明显升高(P0. 05),Vimentin相对含量显著升高(P0. 01),10μg·L~(-1)组细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量显著升高(P0. 01);10μg·L~(-1)的TGF-β1与不同浓度的Tet共培养,与TGF-β1组比较,Tet 5μmol·L~(-1)组,细胞中α-SMA,Vimentin及FN相对含量显著降低(P0. 01),Col-I相对含量明显降低(P0. 05),Tet 10μmol·L~(-1)组,细胞中α-SMA,Vimentin,FN及Col-I的相对含量均显著降低(P0. 01)。结论:TGF-β1能够升高MRC-5细胞中Col-I,FN等细胞外基质的水平,而Tet可以有效抑制这种变化的发生,提示Tet可能对肺纤维化的形成中,成纤维细胞大量分泌细胞外基质的过程有抑制作用。