| PKB/Akt 调节结构域的克隆,表达及初步纯化 |
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| 引用本文： | 王立峰,张健,李莹,苏金,药立波,刘新平. PKB/Akt 调节结构域的克隆,表达及初步纯化[J]. 医学争鸣, 2003, 24(6): 481-484 |
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| 作者姓名： | 王立峰 张健 李莹 苏金 药立波 刘新平 |
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| 作者单位： | 第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033;第四军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室,陕西,西安,710033 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，军队科研项目，39825113,30170465，01Z080，， |
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| 摘 要： | 目的: 克隆akt1的调节结构域 (regulation domain RD )的编码基因,表达并纯化 Akt RD蛋白,为研究 RD的功能奠定基础.方法: 用RT-PCR方法从胚胎肝细胞中获得Akt1调节结构域RD的编码基因,克隆至pMD18-T载体并测序,结果正确后亚克隆到含有6个His的融合表达载体pRSET-A中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达RD/6×His融合蛋白,超声裂菌,将上清通过金属螯合层析进行纯化.结果: 从人胚胎肝细胞中扩增出编码RD的cDNA,序列测定证实与文献报道的序列一致;成功构建了6×His融合的表达载体pRSET-A -RD;表达了RD/6×His融合蛋白,并纯化得到了RD/6×His蛋白. 结论: 成功克隆了人akt1的调节结构域RD基因,构建了6×His融合的表达载体,表达了RD/6×His融合蛋白并得到了纯化的RD/6×His蛋白.
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| 关 键 词： | PKB /Akt 克隆 分子 基因表达 纯化 |
| 文章编号： | 1000-2790(2003)06-0481-04 |
| 修稿时间： | 2002-10-12 |
Cloning,expression and purification of human RD(regulation domain of PKB/Akt) gene in E. coli |
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| WANG Li Feng,ZHANG Jian,LI Ying,SU Jin,YAO Li Bo,LIU Xin Ping. Cloning,expression and purification of human RD(regulation domain of PKB/Akt) gene in E. coli[J]. Negative, 2003, 24(6): 481-484 |
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| Authors: | WANG Li Feng ZHANG Jian LI Ying SU Jin YAO Li Bo LIU Xin Ping |
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| Affiliation: | WANG Li Feng,ZHANG Jian,LI Ying,SU Jin,YAO Li Bo,LIU Xin Ping Department of Biochemistry & Molecular Biology,Fourth Military Medical University,Xi'an 710033,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PKB/AKT cloning molecular gene expression purification |
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