| 重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究 |
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| 引用本文： | 李小鸥,阎媛,周玉,杨渝珍,王宏伟. 重组TACE前肽蛋白对小鼠内毒素血症抑制作用的实验研究[J]. 免疫学杂志, 2009, 25(3): 247-251 |
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| 作者姓名： | 李小鸥 阎媛 周玉 杨渝珍 王宏伟 |
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| 作者单位： | 武汉大学人民医院儿科;华中科技大学同济医学院生化与分子生物学系;华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科 |
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| 摘 要： | 目的 建立小鼠内毒素血症模型,观察肿瘤坏死因子前体转换酶(TACE)前肽结构域对其催化结构域的自身抑制作用,为人工干预炎症过程提供依据和手段.方法 首先利用DNA重组技术分别构建含前肽结构域和催化结构域的重组载体:用PCR方法扩增出TACE的胞外结构域(T1300)和前肽结构域(T391),并克隆至载体pET-28a(+)中,转化至大肠杆菌BL21,经IPTG诱导表达出带有His-tag的目的 蛋白,两者均为包涵体,变性复活后经Ni2+-NTA亲和层析柱对表达的重组蛋白进行纯化.对纯化后的蛋白进行Western印迹分析.构建TACE信号肽+前肽结构域(T648)的真核表达质粒(pEGFP-N1/T648),将其瞬时转染HeLa细胞,通过观察绿色荧光蛋白的表达观察pEGFP-N1/T648转染后在细胞中分布情况.建立小鼠内毒素血症模型组,前肽重组蛋白治疗组和PRS对照组,通过流式细胞术检测小鼠腹腔巨噬细胞mTNF-a的表达,并取肝,肺,肾组织行HE染色,观察纯化的前肽蛋白对炎症的抑制作用.结果 成功构建了pEGFP-N1/T648真核表达载体,在体外转染HeLa细胞,可见荧光主要分布在细胞膜上.流式细胞技术证明重组前肽蛋白可明显对抗LPS诱发的sTNF-a分泌增加,使小鼠腹腔巨噬细胞膜表面mTNF-a增加,常规病理切片HE染色显示该蛋白可降低LPS诱发的小鼠肝,肾,肺组织的炎症反应.结论 TACE前肽重组蛋白降低了sTNF-a的分泌,对炎症有明显的抑制作用,为抗炎药物的设计和改造提供了新的依据和方法.
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| 关 键 词： | 肿瘤坏死因子α 肿瘤坏死因子α转换酶 前肽结构域 抑制剂 |
Inhibitory effects of the recombinant TACE pro-domain on endotoxemia in mice |
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| LI Xiaoou,YAN Yuan,ZHOU Yu,YANG Yuzhen,WANG Hongwei. Inhibitory effects of the recombinant TACE pro-domain on endotoxemia in mice[J]. Immunological Journal, 2009, 25(3): 247-251 |
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| Authors: | LI Xiaoou YAN Yuan ZHOU Yu YANG Yuzhen WANG Hongwei |
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| Affiliation: | LI Xiaoou,YAN Yuan,ZHOU Yu,YANG Yuzhen,WANG Hongwei Department of Pediatrics,Renming Hospital,Wuhan Universicty,Wuhan 430030,China |
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