大鼠心包膜组织WT1阳性细胞的分离、培养和生物学特性(附视频)

目的了解大鼠心包膜组织中分离和培养干细胞的可行性、细胞特性和分化成心肌细胞的能力,为心包膜组织干细胞用于心脏疾病细胞治疗提供理论依据。方法取Wistar大鼠制备心肌梗死模型后取心包组织,胶原酶消化法分离心包膜组织干细胞,并进一步梯度离心纯化,培养并适时传代,测定其生长曲线;分别用流式细胞仪和免疫组织化学法检测分离细胞的免疫表型。用5-氮杂胞苷诱导心包膜组织干细胞向心肌细胞分化,分化后的细胞表型分别用免疫组织化学法和反转录PCR分析检测。结果分离细胞成梭状,体外培养呈良好增长,组织形态与心脏干细胞相似。免疫表型呈CD29、CD44、CD90阳性,部分呈CD106阳性,而CD34和CD45阴性;95%为WT1阳性细胞,并有少量的c-kit、心脏肌钙蛋白T、GATA-4、KDR阳性细胞。在药物诱导7d后,部分细胞聚集成细胞团,可见单个细胞开始自发性博动,可以观测到明显的肌小节结构,并同时有心源性转录因子和结构蛋白在转录水平表达。结论心包膜组织干细胞具有间充质干细胞的基本特征,并具有多样免疫表型,其中以WT1阳性细胞为主;纯化的WT1阳性细胞具有定向分化心肌细胞的潜能,提示心包膜组织可以作为心脏疾病细胞治疗的供体来源之一。