| 稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞系的建立 |
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| 引用本文： | 庄 燕,贲晶晶,柏 惠,陈 琪.稳定表达GFP-LC3的RAW264.7细胞系的建立[J].南京医科大学学报,2009,29(6):757-761766. |
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| 作者姓名： | 庄 燕 贲晶晶 柏 惠 陈 琪 |
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| 作者单位： | 南京医科大学动脉粥样硬化研究中心,江苏,南京,210029
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| 基金项目： | 国家重点基础研究发展规划(973计划) |
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| 摘 要： | 目的:建立稳定表达GFP-LC3的小鼠巨噬细胞RAW264.7细胞系.方法:构建pcDNA3.1-GFP-LC3真核表达载体,应用转染技术将该质粒导入RAW264.7细胞,用G418筛选稳定表达的细胞系.真核细胞中GFP-LC3的表达分别用荧光显微镜与Western blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况.结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光的表达率在95%以上,Western blot结果证实了GFP-LC3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜和Western blot均证明内质网应激可以诱导自噬的发生.结论:用peDNA3.1-GFP-LC3转染的RAW264.7细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型. ern blot方法检测,并利用该稳定表达细胞系观察内质网应激时细胞发生自噬的情况.结果:成功获得2株转染并经G418反复筛选的RAW264.7细胞系,在倒置荧光显微镜下观察可见绿色荧光的表达率在95%以上,Western blot结果证实了GFP-L 3融合蛋白的表达.激光共聚焦显微镜和Western blot均证明内质网应激可以诱导自噬的发生.结论:用peDNA3.1-GFP-LC3转染的RAW264.7细胞经G418筛选,可成功建立GFP-LC3稳定表达系,从而为后续功能实验提供有用的细胞研究模型.
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| 关 键 词： | 基因转染 RAW264.7细胞 稳定表达 自噬 |
| 收稿时间： | 1/6/2009 12:00:00 AM |
Establishment of a stable GFP-LC3-expressed RAW264.7 cell line |
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| ZHUANG Yan,BEN Jing-jing,BAI Hui and CHEN Qi.Establishment of a stable GFP-LC3-expressed RAW264.7 cell line[J].Acta Universitatis Medicinalis Nanjing,2009,29(6):757-761766. |
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| Authors: | ZHUANG Yan BEN Jing-jing BAI Hui and CHEN Qi |
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| Institution: | Atherosclerosis Research Center, NJMU, Nanjing 210029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | GFP-LC3 |
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