补肾活血方中马钱苷、莫诺苷、芍药苷含量测定及其对免疫性卵巢早衰小鼠的影响

目的研究补肾活血方中马钱苷、莫诺苷、芍药苷含量测定方法及其对免疫性卵巢早衰小鼠激素血清卵泡刺激素(follicle-stimulating hormone,FSH)、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、雌二醇(estradiol,E_2)水平的影响。方法 (1)采用HPLC,色谱柱Hypersil ODS C18柱(200 mm×4.6 mm,5μm),流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸溶液(B)梯度洗脱,柱温30℃,流速为1.0 mL/min,进样量10μL,测定补肾活血方中马钱苷、莫诺苷、芍药苷含量;(2)以小鼠透明带3为抗原,皮下多点注射BALB/c雌性小鼠,建立免疫性卵巢早衰模型,分别用补肾活血方、马钱苷、莫诺苷、芍药苷进行干预,并设空白组、模型组为对照,酶联免疫吸附法测定各组FSH、LH、E_2含量。结果 (1)马钱苷、莫诺苷、芍药苷的线性范围分别在58～1 160μg(r=1.000 0)、203～4 070μg(r=0.999 8)及117～2 340μg(r=0.999 4)内,线性关系良好;这3种成分的平均加样回收率分别为98.6%、98.0%、98.8%,RSD分别为2.18%、1.28%、1.77%;在补肾活血方中按生药量计算,莫诺苷、马钱苷、芍药苷的平均含量分别为(4.612±0.057) mg/g、(1.286±0.014) mg/g、(3.065±0.022) mg/g。(2)与空白组比较,模型组E_2水平显著降低(P0.01),FSH和LH的水平均明显升高(P0.01);与模型组比较,补肾活血方组、马钱苷组、莫诺苷组E_2水平均显著升高(P0.01),FSH和LH的水平均显著降低(P0.01),芍药苷组E_2水平显著升高(P0.01),LH的水平显著降低(P0.01),FSH水平降低(P0.05)。结论所建立的HPLC简便、灵敏、准确,可用于补肾活血方中莫诺苷、马钱苷、芍药苷的含量测定;马钱苷、莫诺苷、芍药苷为补肾活血方中可能的药效物质。